表皮葡萄球菌双组分信号转导系统LytS/R和SrrB/A调控功能的研究
发布时间：2021-04-06 15:45
表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis, SE）属革兰氏阳性球菌,凝固酶阴性,广泛存在于人皮肤和粘膜表面,为条件致病菌,其正常情况下很少引起宿主的感染。但近年来,随着各类移植及医用材料在临床上的广泛应用,表皮葡萄球菌成为引起院内感染的前四位病原体之一,引起广泛重视。其致病性主要在于能在医用材料表面形成生物膜（biofilm）,从而增强对抗生素的耐药性,抵御机体的免疫应答反应,造成慢性反复感染,所致疾病难以治愈。表皮葡萄球菌生物膜的主要组成成分是细胞间多糖黏附素（Polysaccharide Intercellular Adhesion, PIA）,它由ica操纵子编码的蛋白参与合成,主要介导了细菌间的互相黏附。细菌的双组分信号转导系统（Two-component Signal Transduction Systems, TCSs）广泛存在于革兰氏阳性和阴性细菌中,参与感应外界环境信号,并迅速将信号传入菌体内,从而启动一系列相关基因的转录、表达以及表达产物的修饰,以增强细菌在不同环境下的生存能力。此外,研究表明双组分信号转导系统还参与调控病原菌的毒力和致病性,...
【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
表皮葡萄球菌1457株LytS和LytR蛋白的功能域分析
砥て咸亚蚓鶯yts瓜双组分信号转导系统调控功能的研究图1一 2sE1457)妙tsR基因同源重组机制及其上下游序列分析Figurel一 2PhysiealmaPofthely巧次 oPeronofS.eP翻lerm衣li，14万 7and eonstructionofly巧火 knoekoutmutant ArrowsdePietoPenreadingframesandindieatetheirorientations.如才朋 oPeronwererePlaced withthee叨 hromyeinresistaneegene(ermB)asindieated.TheermBgeneandehromosomal regionsflankingtheeorresPondingdeletionswereamPlifiedbyPCRandelonedintoPlasmidPBTZ， yieldingtheintegrationveetorsPBTZ一』 lytSR.Theerossesindicatethesitesofhomologousreeomblnation.skb一 2.skb一 3.3kb图1一3大肠杆菌中质粒pBTZ一刁加了￡天酶切鉴定Figurel一 3ValidationthePlasmidPBTZ一约，巧月 inE.coliDH5abyrestriction endonucleasedoubledigest Lanel:D15000DNAmarker;LaneZ:thereeombinantPlasmidPBTZ一JlytSR;Lane3:reeuttingPBTZ一 JlyISRbyEeoRIandNhel;Lane4:recuttingPBTZ一』 lytSRbyBamHIandHindlll2.2同源重组质粒pBTZ通加巧次在金黄色葡萄球菌RN4220中的修饰及在表皮葡萄球菌1457株中的转化大肠杆菌来源的DNA进入葡萄球菌体系后由于革兰阴性和阳性菌的宿主特异陛识别系统 (hostspeeifieitydetermination，hsd)不同会被降解。因此在转化表皮葡萄球菌之前需先将重组质粒转化入限制缺陷 (:estrictiondeficient)的金黄色葡萄球菌RN422O株中进行修饰。同时
分别进行PCR扩增，并以1457野生株基因组模板为阴性对照。结果显示以突变株基因组为模板能扩增出与预期大小相一致的DNA片段，分别为2.skb和3.Okb，而以野生株基因组为模板则不能扩增出相应大小的片段(图1一4)。随后对突变株的PCR产物进行测序，结果显示妙了￡天基因已经成功被红霉素抗性基因替换。skb 2.skb图1一4基因组PCR鉴定表皮葡萄球菌lytSR突变株Figurel一 4ValidationofS.eP翻份rmi减 151457约，乙宝况 strainbygenomicPCR Lane1and3:lylSRdownstreamfragmentPlusermfragment(3.okb)fromSE1457WTand』lytSR， resPeetively;Lane2and4:lytSRupstreamfra卿 entplusermfra脚ent(2·skb)from SE1457WTand」lylSR，resPeetively;M:DL15000bpDNAmarker.以突变株cDNA作为模板PcR扩增lytR基因，结果未能得到特异性的产物，而以1457野生株作为阳性对照的PCR反应扩增出了与预期一致的473bp大小的核酸片段(图l一5)。
本文编号：3121691
【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
表皮葡萄球菌1457株LytS和LytR蛋白的功能域分析
砥て咸亚蚓鶯yts瓜双组分信号转导系统调控功能的研究图1一 2sE1457)妙tsR基因同源重组机制及其上下游序列分析Figurel一 2PhysiealmaPofthely巧次 oPeronofS.eP翻lerm衣li，14万 7and eonstructionofly巧火 knoekoutmutant ArrowsdePietoPenreadingframesandindieatetheirorientations.如才朋 oPeronwererePlaced withthee叨 hromyeinresistaneegene(ermB)asindieated.TheermBgeneandehromosomal regionsflankingtheeorresPondingdeletionswereamPlifiedbyPCRandelonedintoPlasmidPBTZ， yieldingtheintegrationveetorsPBTZ一』 lytSR.Theerossesindicatethesitesofhomologousreeomblnation.skb一 2.skb一 3.3kb图1一3大肠杆菌中质粒pBTZ一刁加了￡天酶切鉴定Figurel一 3ValidationthePlasmidPBTZ一约，巧月 inE.coliDH5abyrestriction endonucleasedoubledigest Lanel:D15000DNAmarker;LaneZ:thereeombinantPlasmidPBTZ一JlytSR;Lane3:reeuttingPBTZ一 JlyISRbyEeoRIandNhel;Lane4:recuttingPBTZ一』 lytSRbyBamHIandHindlll2.2同源重组质粒pBTZ通加巧次在金黄色葡萄球菌RN4220中的修饰及在表皮葡萄球菌1457株中的转化大肠杆菌来源的DNA进入葡萄球菌体系后由于革兰阴性和阳性菌的宿主特异陛识别系统 (hostspeeifieitydetermination，hsd)不同会被降解。因此在转化表皮葡萄球菌之前需先将重组质粒转化入限制缺陷 (:estrictiondeficient)的金黄色葡萄球菌RN422O株中进行修饰。同时
分别进行PCR扩增，并以1457野生株基因组模板为阴性对照。结果显示以突变株基因组为模板能扩增出与预期大小相一致的DNA片段，分别为2.skb和3.Okb，而以野生株基因组为模板则不能扩增出相应大小的片段(图1一4)。随后对突变株的PCR产物进行测序，结果显示妙了￡天基因已经成功被红霉素抗性基因替换。skb 2.skb图1一4基因组PCR鉴定表皮葡萄球菌lytSR突变株Figurel一 4ValidationofS.eP翻份rmi减 151457约，乙宝况 strainbygenomicPCR Lane1and3:lylSRdownstreamfragmentPlusermfragment(3.okb)fromSE1457WTand』lytSR， resPeetively;Lane2and4:lytSRupstreamfra卿 entplusermfra脚ent(2·skb)from SE1457WTand」lylSR，resPeetively;M:DL15000bpDNAmarker.以突变株cDNA作为模板PcR扩增lytR基因，结果未能得到特异性的产物，而以1457野生株作为阳性对照的PCR反应扩增出了与预期一致的473bp大小的核酸片段(图l一5)。
本文编号：3121691
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