重组人碱性成纤维细胞生长因子对脂肪干细胞分化的影响

发布时间：2017-04-17 10:09

  本文关键词：重组人碱性成纤维细胞生长因子对脂肪干细胞分化的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的 本实验目的在于探讨不同浓度重组人碱性成纤维细胞生长因子(Recombinant Human FGF-basic, rh-bFGF)对体外培养的人脂肪源干细胞(human adipose-derived stem cells, hAS Cs)诱导分化为脂肪细胞的影响,通过观察hASCs诱导分化为脂肪细胞中新形成脂滴出现的时间、新形成脂肪细胞的增殖速率和成熟脂滴表面定位蛋白CIDEC的表达量,从而寻找体外促进hASCs向脂肪细胞分化所需加入rh-bFGF的最佳浓度。 材料与方法 1.郑大五附院健康抽脂患者获得脂肪混悬液,采用胶原酶消化的方法,分离、提取hASCs,进行体外培养、扩增,在显微镜下进行细胞形态的观察,台盼蓝染色后对hASCs进行计数,应用流式细胞仪进行细胞表型的鉴定。将传至第三代的细胞进行成脂诱导并用油红O染色对其进行鉴定。 2. hASCs传至第三代时,分四组进行成脂诱导,将加入Ong/ml rh-bFGF的设为对照组,将加入10ng/mlrh-bFGF,20ng/ml rh-bFGF,40ng/ml rh-bFGF设为实验组。各组分别用油红O染色连续监测脂滴出现时间,并比较其差异是否有统计学意义。 3.各组分别于加入不同浓度的rh-bFGF之后的12h、24h、48h用MTT比色法检测hASCs诱导分化为脂肪细胞的细胞增殖率。 4.各组在成脂诱导的14d时,运用western印迹法检测成熟脂滴定位蛋白CIDEC的蛋白表达量,并比较其差异。 结果 1.体外提取、培养的hASCs光镜下观察成梭形,流式细胞仪鉴定其表型均符合hASCs标准,成脂诱导第7天后镜下观察到大小不一的脂滴,油红O染色呈阳性。 2.各组在油红O染色时定性记录脂滴出现时间,实验组和对照组之间平均出现脂滴时间比较p0.05,差异有统计学意义。实验组各组间比较差异有统计学意义。其中40ng/ml rh-bFGF出现脂滴平均时间为(11.5±1.9)h。 3.各组分别加入不同浓度rh-bFGF后的12h、24h、48h,MTT比色法检测新形成脂肪细胞的增殖率。其中40ng/ml rh-bFGF的吸光度平均值为0.522±0.100。 4. Western印迹法检测实验组和对照组新形成脂滴表面定位蛋白CIDEC的表达量并进行比较,差异均有统计学意义(p0.05)。 结论 实验组能缩短体外hASCs分化为脂肪细胞的时间和促进成脂细胞的增殖,脂滴表面蛋白CIDEC表达量随着实验组浓度升高而持续增加。其中以40ng/ml rh-bFGF为最佳浓度。
【关键词】：脂肪干细胞 重组人碱性成纤维细胞生长因子 脂肪细胞 诱导分化
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文~.略词对照表10-11
• 前言11-14
• 材料和方法14-23
• 结果23-26
• 讨论26-30
• 参考文献30-33
• 附图33-43
• 综述43-62
• 参考文献56-62
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果62-63
• 致谢63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

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1 李烦繁;CIDEC在人脂肪细胞分化中的作用及其机制研究[D];第四军医大学;2010年

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本文编号：312983