消减SELEX技术的建立

发布时间：2021-04-12 06:29

　　恶性肿瘤是目前人类死亡的主要原因之一。人类对肿瘤的早期诊断和有效治疗缺乏特异性是恶性肿瘤对人类生存产生巨大威胁的主要原因。目前所发现并用于早期临床诊断的肿瘤标志物与正常细胞相比还没有质的区别,只是量的不同,缺乏真正的特异性;手术切除、放疗和化疗的联合应用是目前临床上治疗肿瘤的主要手段,虽然手术切除是去除实体瘤组织的有效方法,但在切除肿瘤组织的同时把一部分正常组织也扩大切除了,对人体创伤大,并且还有复发和转移的危险,术后仍需放疗和化疗,但是,不论是放射性同位素还是化疗药物对于肿瘤细胞和正常细胞都不加区分的一起杀死,因此在治疗肿瘤的同时也对人体造成了极大的损害,并且由于不能使用较大剂量而严重影响放疗和化疗的效果。当前恶性肿瘤早期诊断和有效治疗方面存在的诸多不利因素的一个根本原因是人们对正常细胞和恶性肿瘤细胞之间差异的理解缺乏足够的知识。 SELEX（Systematic evolution of ligands by exponential enrichment）技术是20世纪90年代发展起来的一种生物文库技术,该技术的目的就是利用人工合成的随机寡核苷酸文库筛选某一靶分子的特异寡核苷... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：72 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

ssDNA和dsDN^在，M尿素12../，

变性PAGE中的电泳行为是不同的，ssDN结构，泳动速度比dsDNA文库慢。卜DNA2:85bP3:85bP.1、ssDNA和dsDN^在，M尿素12../变性p^G这一特点，用不对称PCR的方法首先扩得到ssDNA文库，用于下一轮筛选。一轮筛选并扩增与蛋白结合的配基后，分不对称PCR扩增35个循环，7M尿素12板量，不对称PCR扩增并切胶纯化。

图IJ、原库10个阳性克陡洲序圈谱分析测序结果发现:文库两端固定引物退火序列均正确，随机序列中A、T、C、G四种碱基的含量与理论值(各占25%)接近，分别为:A24.86%，T:27.03%，C:21.08%，G:27.03%。10个阳性克隆中的随机序列见图1.4。1、CTCGGGAG(关右丁入几TTTCCTTGACG2、CAATAATAGCATTCCCTAAGCCTGT3、士几几NCGTTCTTACGGAGTGCGCTGG4、CGATACCTGTTTCTT口蚊粉T及C入5、GGTTCGTTAGACCTGTAAACGAATA6、几C公国献公(通勿已灿杖公J心GCTGGGCG，、CG于CA侧灿蚊从孟TGTCGTTAGGCTGA8、蕊里蕊了了CCGTTCAGTA勿以翔枕场汉丁GC，、见人TTAAAGTGCCC阳U以该州刃妓犯GA10、CGTACCCGCAATC己灿珑汤自盆祀TTC图1.4、原库10个阳性克陇中的健机序列

【参考文献】：
期刊论文
[1]适配体及其在生物医药和诊断分析方面的应用[J]. 董海燕,王杰,张婷,马季,韩龙宇,涂小煌,贾力.  药物分析杂志. 2016(03)

博士论文
[1]主要DSP毒素免疫学检测方法及沿海市售海产品污染调查[D]. 林超.吉林大学 2014

硕士论文
[1]应用双向热循环消减SELEX技术筛选肺癌血清核酸适配体[D]. 陈聪盈.兰州理工大学 2019
[2]灭活溶藻弧菌适配子的SELEX筛选及其应用研究[D]. 汤学敏.集美大学 2013
[3]哈维氏弧菌适配子的SELEX筛选及分析[D]. 郝聚敏.集美大学 2012



本文编号：3132807