重组Bb（pGEX-OprF-I）疫苗的构建及对小鼠的诱导保护作用

发布时间：2021-04-14 05:57

　　目的构建和鉴定重组两歧双歧杆菌介导的铜绿假单胞菌外膜蛋白F-I[rBb（pGEX-OprF-I）]疫苗,研究其对小鼠抗铜绿假单胞菌感染的免疫保护作用。方法 PCR扩增OprF和OprI基因,采用基因拼接法剪切,得到OprF-I融合基因,双酶切后定向克隆至载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprF-I,将该质粒电转化两歧双歧杆菌（Bb）,构建rBb（pGEX-OprF-I）疫苗并进行双酶切和PCR鉴定,经异丙基-β-D硫代-吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达, SDS-PAGE和Western blot法分析和鉴定表达产物。将21只BALB/c鼠随机分成疫苗组、 Bb-pGEX-1λT空载体和Bb对照组,取5×10⁸菌落形成单位（CFU）疫苗口服灌胃,每周连续接种3 d,持续3周。初次免疫后4周用5×10⁷ CFU PA01株滴鼻攻击,攻击后2周无菌杀鼠,计数肺组织的细菌菌落数。常规ELISA检测免疫前、初次免疫后4周和攻击后2周的小鼠静脉血中IgG水平。结果 PCR扩增出1289 bp的OprF-I融合基因;双酶切和PCR鉴定证实该基... 

【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2019,35(07)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

疫苗免疫及PA01株攻击后小鼠肺细菌的菌落数1:rBb(pGEX-OprF-I)疫苗组;2:空载体对照组;3:Bb对照组．aP＜0．05vs其余两组．

飨约跎?计数免疫小鼠肺细菌的菌落数发现，rBb(pGEX-OprF-I)疫苗组的菌落数量较空载体和Bb对照组明显减少，差异有统计学意义(P＜0．05)，空载体和Bb对照组间差异无统计学意义(P＞0．05，图4)。1:rBb(pGEX-OprF-I)疫苗组;2:空载体对照组;3:Bb对照组．aP＜0．05vs其余两组．图4疫苗免疫及PA01株攻击后小鼠肺细菌的菌落数2．5疫苗组小鼠的血清IgG水平升高通过ELISA检测小鼠免疫前、初次免疫后4周和攻击后2周的血清IgG水平(图5)，结果表明，同一时间点比较，3组间的免疫前血清IgG水平变化不大，差异无统计学意义(P＞0．05)，而初次免疫后4周和攻击后2周的疫苗组血清IgG水平明显高于空载体和Bb对照组(P＜0．01);同组在不同时间点比较，3组的血清IgG水平均表现为攻击后2周＞初次免疫后4周＞免疫前，差异均有统计学意义(P＜0．01)。1:免疫前;2:初次免疫后4周;3:攻击后2周．bP＜0．01vs1;dP＜0．01vs2．图5疫苗免疫及PA01株攻击后小鼠血清IgG水平3讨论Gomi等［19］构建了腺病毒介导的OprF蛋白疫苗，将其免疫小鼠可产生强烈抗感染的细胞和体液免疫应答;Hassan等［20］将重组OprI蛋白疫苗皮下接种BALB/c小鼠后也可使免疫小鼠产生较高水平的特异性IgG，减轻肺组织损伤，提示OprF和OprI具有良好的免疫原性。多抗原成分的融合是目前Pa疫苗开发的重要方向［21］。Zhang等［22］发现重组减毒伤寒沙门菌介导的F-1融合蛋白疫苗皮下注射小鼠后可在血清和肺组织

【参考文献】：
期刊论文
[1]铜绿假单胞菌OprF/I融合蛋白疫苗研制现状[J]. 梁诚诚,李文桂.  生物技术通讯. 2019(01)
[2]分子佐剂IL-17与IL-2对铜绿假单胞菌外膜蛋白OprI免疫效果的影响[J]. 卿蕊,向晴可,刘众齐,肖非,阳帆.  免疫学杂志. 2018(07)
[3]铜绿假单胞菌重组Bb-pGEX-OprI疫苗的构建及其保护力的研究[J]. 刘潇,李文桂,罗广旭.  四川大学学报(医学版). 2018(01)
[4]两歧双歧杆菌介导的铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ（Bb-OprⅠ）疫苗免疫增强小鼠对铜绿假单胞菌的抑制作用[J]. 刘潇,李文桂.  细胞与分子免疫学杂志. 2017(08)
[5]铜绿假单胞菌重组Bb-OprF疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的研究[J]. 朱佑明,罗永艾,李文桂.  免疫学杂志. 2012(03)



本文编号：3136798