ATF6腺病毒的构建及对软骨细胞凋亡的研究

发布时间：2017-04-18 16:22

  本文关键词：ATF6腺病毒的构建及对软骨细胞凋亡的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 构建携人ATF6基因的重组腺病毒Ad-ATF6和siATF6，并探讨其对软骨细胞凋亡的影响。为进一步研究ATF6基因的生物学功能奠定基础，为与ERS相关的软骨发育疾病提供一定的参考价值。 方法 利用AdEasy TM腺病毒载体系统，构建重组腺病毒Ad-ATF6和siATF6，RT-PCR和Western blot在软骨细胞ATDC5中检测感染效果。Ad-ATF6分别感染软骨细胞ATDC5和C28I2，FCM检测细胞的增殖和凋亡；siATF6感染经TM处理的SW1353细胞，FCM、MTT和Westernblot检测ERS时细胞的凋亡情况；BMP2诱导ATDC5和C3H10T1/2细胞分化过程中，用Ad-ATF6和siATF6感染细胞，FCM、免疫组化、TUNEL和Western blot等检测软骨细胞分化过程中的凋亡情况。 结果 成功获得高滴度的重组腺病毒Ad-ATF6和siATF6；Ad-ATF6处理组的ATDC5细胞和C28I2细胞凋亡率明显增加（P0.05）、增殖率明显降低（P0.05）；TM+siATF6处理组SW1353细胞凋亡率明显高于TM+Ad-ATF6处理组（P0.05）；BMP2诱导ATDC5和C3H10T1/2细胞及骨组织分化过程中，Ad-ATF6处理组凋亡明显高于siATF6处理组（P0.05）。 结论 非ERS状态下，，过量的ATF6会诱导软骨细胞的凋亡，抑制其增殖；ERS状态下，ATF6能够帮助细胞恢复正常状态，抑制细胞的凋亡，促进其增殖；BMP2诱导软骨分化过程中，ATF6能够促进内质网应激介导的凋亡。
【关键词】：ATF6 重组腺病毒 软骨细胞 凋亡
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R373
【目录】：

• 英汉缩略词名词对照5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-12
• 第一部分 Ad-ATF6 腺病毒的构建和鉴定12-22
• 1 材料与方法12-19
• 2 结果19-21
• 3 小结21-22
• 第二部分 siATF6 腺病毒的构建与鉴定22-27
• 1 材料与方法22-24
• 2 结果24-26
• 3 小结26-27
• 第三部分 ATF6 对软骨细胞凋亡的研究27-35
• 1 材料与方法27-29
• 2 结果29-33
• 3 小结33-35
• 第四部分 ATF6 对软骨分化过程中内质网应激介导凋亡的研究35-44
• 1 材料与方法35-38
• 2 结果38-42
• 3 小结42-44
• 全文总结44-45
• 参考文献45-47
• 文献综述47-54
• 参考文献50-54
• 致谢54-55
• 攻读学位期间发表的学术论文55-56

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本文编号：315295