小鼠Foxp3-△PRD/△FKH基因克隆及其功能的研究

发布时间：2021-05-09 09:12

　　目的:克隆小鼠Foxp3-△PRD（N末端富含脯氨酸区域缺失的Foxp3片段）和Foxp3-△FKH（C末端FKH区域缺失的Foxp3片段）基因,构建带穿膜序列PTD（protein20transduction20domain）的原核表达载体,表达、纯化并复性PTD-△PRD、PTD-△FKH、PTD-eGFP-△PRD、PTD-eGFP-△FKH融合蛋白,并初步探讨其生物学功能,为进一步研究Foxp3的免疫抑制机制奠定基础。方法:（1）利用PCR技术扩增获得小鼠△PRD和△FKH基因,将其克隆至pMD18-T载体,进行单、双酶切鉴定及序列分析。（2）将测序正确的△PRD和△FKH基因克隆到带穿膜序列的pET28a-PTD和pET28a-PTD-eGFP原核表达载体中,并在大肠埃希菌Rosetta（DE3）中表达,获得带有His标签的融合蛋白,利用Bio-Rad公司的镍柱纯化融合蛋白,并进行蛋白复性。（3）利用Western-blot技术检测融合蛋白表达的正确性,流式细胞术和Western-blot检测融合蛋白穿膜进入小鼠T淋巴细胞瘤株EL-4细胞中的能力,并通过混合淋巴细胞反应初步分... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 Foxp3在免疫调节中的作用
        1.1.1 调节性T细胞及其在免疫调节中的作用
        1.1.2 Foxp3的一般特性
        1.1.3 Foxp3的生物学功能
        1.1.4 Foxp3的信号通路
        1.1.5 Foxp3在自身免疫性疾病中的作用
    1.2 PTD在蛋白转导中的作用
    1.3 本研究的目的和研究内容
        1.3.1 研究目的
        1.3.2 研究意义
        1.3.3 研究方法及技术
        1.3.4 试验方案的设计
第二章 小鼠Foxp3-△PRD/△FKH基因的克隆
    2.1 材料方法
    2.2 结果
    2.3 讨论
第三章 小鼠PTD-Foxp3相关融合蛋白的表达、纯化及复性
    3.1 材料方法
    3.2 结果
    3.3 讨论
第四章 小鼠PTD-Foxp3相关融合蛋白功能的初步研究
    4.1 材料方法
    4.2 结果
    4.3 讨论
第五章 主要结论和展望
    5.1 主要结论
    5.2 展望
参考文献
附录
致谢
攻读硕士期间发表的论文



本文编号：3177036