BCG热休克蛋白65-HER2多表位融合蛋白

发布时间：2021-05-10 03:08

　　HER220是I20型酪氨酸激酶家族的成员之一,是分子量为185KD20的跨膜糖蛋白受体。正常情况下HER220蛋白在乳腺上皮细胞和全身多种组织和细胞表面有低水平的表达。HER220蛋白在25-30%的乳腺癌细胞表面有高水平的表达;HER220蛋白的高表达和对多种化疗药物的耐受以及临床的不良预后相关。HER220蛋白是一个安全有效的肿瘤治疗靶点。以高表达HER220蛋白为治疗靶点的多种药物已经上市或正在进行临床研究。分子量为65KD20的卡介苗热休克蛋白（BCG20HSP65）是一种分子伴侣。在免疫应答的过程中,HSP6520可引导与其形成复合物或融合蛋白的抗原肽在树突状细胞内经MHC20I20类途径加工递呈,从而激活基于抗原特异性细胞毒性T20淋巴细胞（CTLs）的免疫反应。热休克蛋白已经成为可以激活细胞毒性T20淋巴细胞免疫反应的分子佐剂。我们设计的免疫治疗制剂目的是通过特异性细胞毒效应（CTL）来治疗乳腺肿瘤。这种免疫治疗制剂是将结核杆菌热休克蛋白6520的编码基因和人HER2多CTL20表位基因融合。在大肠杆菌成功地表达了卡介苗热休克蛋白65-多表位HER220融合蛋白,即HS... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

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英文缩写词表
前言
第一章 文献回顾
    一、HER2 研究综述
        (一) 前言
        (二) HER2 的过度表达和乳腺癌
        (三) HER2 表达水平的检测
        (四) HER2 是肿瘤治疗的分子靶点
    二、热休克蛋白的研究现状
        (一) 概述
        (二) 合成
        (三) HSP的释放
        (四) HSPs的受体和信号传递
        (五) 生物学作用
第二章 材料与方法
    一、实验材料
        (一) 限制性内切酶及其它试剂
        (二) 质粒与菌株
        (三) 细胞株和实验动物
        (四) 引物的合成
        (五) 培养基
        (六) 抗体
    二、主要方法
        (一) 采用PCR法合成特异性基因/DNA片段
        (二) DNA 片段的TA克隆
        (三) 相关质粒的构建
        (四) 816/HER2 转染细胞的建立和鉴定
        (五) 融合蛋白的表达和纯化
        (六) HSP-HER2ME的小鼠试验
        (七) HSP-HER2ME的人体外实验
第三章 实 验 结 果
    一、获取HSP-HER2ME重组蛋白
    二、获取Chap10-HER2ME重组蛋白
    三、获取TAT-HER2ME重组蛋白
    四、制备HER2ME转染816 细胞
    五、HSP-HER2ME蛋白的CTLs诱生及抗肿瘤活性
        (一) HSP-HER2ME的CTLs诱生作用
        (二) HSP-HER2ME对装载TAT-HER2ME肿瘤细胞生长的抑制作用
        (三) HSP-HER2ME对816/HER2ME肿瘤细胞生长的抑制作用
    六、HSP-HER2ME蛋白对人免疫细胞的生物学作用
        (一) HSP-HER2ME对人PBMC的激活作用
        (二) HSP-HER2ME对人DCs的表面标志的诱导作用
        (三) HSP-HER2ME对HER2 特异性CTLs的诱生作用
    图和照片
第四章 讨论
    一、外源蛋白在大肠杆菌中的表达
    二、免疫学经典抗原递呈途径和交叉抗原递呈途径
    三、肿瘤的免疫治疗
    四、肿瘤免疫制剂
        (一) 肿瘤抗原
        (二) 抗肿瘤细胞免疫中的CTL表位肽
        (三) HER2 特异性表位肽的选取
        (四) 间隔序列的选取
        (五) DCs在抗肿瘤免疫中的作用
    五、HER2 为靶点的肿瘤免疫治疗
    六、HSP的免疫学
    七、HSP-HER2ME能在小鼠体内抑制表达HER2 肿瘤细胞的生长
    八、人体外实验表明HSP-HER2ME能产生HER2 特异性的CTL反应
结论
参考文献
致谢
攻读博士期间发表论文和/或申报专利情况
个人简历
中文摘要
ABSTRACT
吉林大学博士学位论文原创性声明



本文编号：3178557