SPARC对造血发育的影响及机理研究

发布时间：2021-05-14 18:55

　　目前关于富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（SPARC）的功能研究主要集中在对肿瘤的生长、转移和预后的影响,而对造血发育影响的研究较少。5q-骨髓增生异常综合征（5q-MDS）患者骨髓细胞中SPARC的表达水平降低；免疫调节剂lenalidomide治疗5q-MDS患者,能抑制恶性幼红细胞的增殖,同时SPARC的表达上调。此外,SPARC缺失小鼠对脂多糖（LPS）刺激的反应降低,并且骨髓中CD19+B淋巴细胞数量减少,提示SPARC可能参与调节红细胞和B淋巴细胞的发育。本研究以SPARC缺失小鼠为研究对象,研究SPARC在红细胞和B淋巴细胞发育中的作用。本研究包括三部分,分述如下：第一章SPARC在红细胞发育过程中的作用及机理研究目的：分析SPARC缺失小鼠体内红细胞的发育,并探讨SPARC影响红细胞发育的机理；研究SPARC蛋白对人红细胞发育的影响。方法：采用血液分析仪,流式细胞技术,体外集落培养和骨髓移植技术,分析SPARC缺失小鼠体内红细胞的发育；采用磁珠分选脐血CD34+细胞,体外集落培养和体外红细胞诱导分化技术,研究SPARC蛋白对人红细胞发育的影响。结果：1、SPARC缺失小鼠外周... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：113 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
专业名词縮写中英文对照表
第一章 SPARC在红细胞发育过程中的作用及机理研究
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 耗材
        1.1.3 解剖器械
        1.1.4 培养基和因子
        1.1.5 检测试剂
        1.1.6 仪器设备
    1.2 方法
        1.2.1 小鼠基因型鉴定
        1.2.2 Western blotting分析
        1.2.3 外周血分析
        1.2.4 制备骨髓细胞悬液
        1.2.5 制备脾脏细胞悬液
        1.2.6 流式分析骨髓细胞
        1.2.7 流式分析脾脏细胞
        1.2.8 小鼠骨髓细胞体外集落培养
        1.2.9 人脐CD34+细胞体外集落培养
        1.2.10 脾脏集落形成单位
        1.2.11 苏木素和伊红染色
        1.2.12 骨髓细胞长期培养
        1.2.13 造血重建
        1.2.14 归巢实验
        1.2.15 免疫磁珠分选人脐CD34+细胞
        1.2.16 脐血CD34+细胞体外分化为红细胞
        1.2.17 流式细胞技术检测诱导分化产生的红细胞
        1.2.18 联苯胺染色
        1.2.19 凋亡分析
        1.2.20 统计学分析
    1.3 结果
        1.3.1 小鼠基因型的鉴定
        1.3.2 SPARC缺失小鼠体内红系祖细胞减少
        1.3.3 SPARC缺失小鼠脾脏造血活跃
        1.3.4 SPARC缺失型BMCs的体外造血分化能力降低
        1.3.5 SPARC缺失型骨髓造血微环境支持红系造血的能力受损
        1.3.6 SPARC缺失不影响造血细胞的归巢
        1.3.7 重组SPARC蛋白促进脐血CD34+细胞形成红系祖细胞
        1.3.8 重组SPARC蛋白促进人红细胞分化过程中Hb的合成
    1.4 讨论
    1.5 附图
第二章 SPARC在B淋巴细胞发育过程中的作用及机理研究
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 培养基及细胞因子
        2.1.3 耗材与仪器设备
        2.1.4 检测试剂
    2.2 方法
        2.2.1 流式分析外周血
        2.2.2 流式分析骨髓中B淋巴祖细胞
        2.2.3 流式分析骨髓中LSK细胞
        2.2.4 长期培养启动细胞
        2.2.5 脾脏集落形成实验(CFU-S_(12))
        2.2.6 体外pre-B集落培养
        2.2.7 收集骨髓基质细胞条件培养液
        2.2.8 体外B淋巴细胞分化
        2.2.9 流式分析体外分化产生的B淋巴细胞
        2.2.10 B淋巴细胞增殖的检测
        2.2.11 B淋巴细胞的凋亡检测
        2.2.12 免疫荧光染色
        2.2.13 Real-time RT-PCR
        2.2.14 Western blotting
        2.2.15 基因芯片分析(Microarray analysis)
        2.2.16 统计学分析
    2.3 结果
        2.3.1 SPARC缺失小鼠B淋巴细胞发育障碍
        2.3.2 SPARC缺失小鼠骨髓中B淋巴祖细胞减少
        2.3.3 SPARC缺失小鼠骨髓中原始造血细胞(LSK)减少
        2.3.4 SPARC缺失型造血微环境支持B淋巴细胞发育的能力受损
        2.3.5 SPARC缺失型BMSCs抑制B淋巴细胞的分化
        2.3.6 SPARC缺失型BMSCs抑制B淋巴细胞的增殖
        2.3.7 重组SPARC蛋白不直接影响B淋巴细胞的分化
        2.3.8 SPARC缺失型BMSCs分泌可溶性因子抑制B淋巴细胞的分化
        2.3.9 SPARC缺失不影响IL-7和SDF-1的表达
        2.3.10 基因芯片分析SPARC缺失型和野生型BMSCs
    2.4 讨论
    2.5 附图
第三章 脂肪细胞对B淋巴细胞发育影响的初步研究
    3.1 材料
        3.1.1 实验动物及细胞系
        3.1.2 耗材、试剂和仪器设备
    3.2 方法
        3.2.1 OP9细胞分化为脂肪细胞
        3.2.2 油红O染色
        3.2.3 RT-PCR
        3.2.4 收集脂肪细胞条件培养液
        3.2.5 B淋巴细胞体外分化
        3.2.6 流式分析B淋巴细胞
        3.2.7 体外pro-B和pre-B集落培养
        3.2.8 流式分析pro-B和pre-B集落
        3.2.9 Pro-B细胞分化为pre-B细胞
        3.2.10 统计学分析
    3.3 结果
        3.3.1 OP9细胞诱导分化为脂肪细胞
        3.3.2 脂肪细胞抑制B淋巴细胞的分化
        3.3.3 脂肪细胞抑制B淋巴祖细胞的发育
        3.3.4 脂肪细胞条件培养液抑制B淋巴细胞的分化
        3.3.5 脂肪细胞抑制pro-B分化为pre-B细胞
    3.4 讨论
    3.5 附图
总结
参考文献
综述
    参考文献
附录
攻读学位期间主要的研究成果
致谢
基金资助



本文编号：3186153