重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子生物学活性测定TF-1细胞/MTT比色法的优化及其验证

发布时间：2021-06-09 08:32

　　目的对检测重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor,rh GM-CSF）生物学活性的TF-1细胞/MTT比色法进行优化及验证。方法以rh GM-CSF依赖细胞株TF-1为靶细胞,采用MTT比色法测定rh GM-CSF生物学活性,对比色法中裂解液种类、裂解时间、细胞浓度、MTT作用时间等进行优化,并对优化后的方法进行准确度和精密度验证。结果优化后的TF-1细胞/MTT比色法:将供试品及标准品稀释至18 IU/ml,做2倍系列稀释,共8个稀释度,50μl/孔;加入6×10⁵个/ml TF-1细胞悬液,50μl/孔,37℃培养48⁵2 h;加入MTT溶液,20μl/孔,37℃培养5 h;加入15%SDS裂解液,150μl/孔,裂解过夜,检测A570值。3种不同浓度的rh GM-CSF标准品活性测定结果回收率为104%;rh GM-CSF标准品6次检测活性平均值为18.6 IU/ml,变异系数为5.37%;rh GM-CSF标... 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2015,28(12)CSCD

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

不同细胞浓度作用时TF-1细胞的增殖曲线

不同裂解液作用1h（A，B）和16h（C，D）时TF-1细胞增殖曲线

加入MTT后不同时间测定的TF-1细胞增殖曲线

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3220248