人真核翻译起始因子3C基因的克隆及表达

发布时间：2021-06-20 07:20

　　目的构建人真核翻译起始因子3C（Eukaryotic Translation Initiation Factor 3 Subunit C,EIF3C）编码区全长的真核表达载体,转染FaDu人下咽鳞癌细胞系,为探讨EIF3C的生物学功能奠定基础。方法从人下咽鳞癌细胞系中提取总RNA,反转录成cDNA后用特异性引物PCR扩增EIF3C基因编码区全长（NM₀01037808.2）,双酶切后将EIF3C基因编码区全长克隆到载体pCMV-Blank上,构建真核表达载体pCMV-EIF3C。转染FaDu细胞系,real-timePCR和Western blot检测EIF3C表达水平。将未加质粒转染FaDu细胞作为未加质粒转染组,加质粒pCMV-Blank作为pCMV-Blank转染组,以及加质粒pCMV-EIF3C作为pCMV-EIF3C转染组。分别将pCMV-EIF3C转染组EIF3C的mRNA和蛋白表达水平与未加质粒转染组、pCMV-Blank转染组进行比较,以及比较未加质粒转染组和pCMV-Blank转染组。通过生物信息学网站和软件分析人EIF3C氨基酸序列的理化性质、... 

【文章来源】：西部医学. 2019,31(09)

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 一般资料
        1.1.1 质粒、菌株及细胞系
        1.1.2 工具酶及主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 目的基因PCR扩增
        1.2.2 真核表达载体pCMV-EIF3C构建
        1.2.3 FaDu细胞的体外转染
        1.2.4 转染细胞EIF3C表达情况鉴定
        1.2.5 EIF3C蛋白生物信息学分析
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 人EIF3C基因的克隆
    2.2 真核表达载体pCMV-EIF3C的构建及鉴定
    2.3 转染细胞EIF3C的mRNA和蛋白表达情况检测
    2.4 人EIF3C的理化性质和结构分析
3 讨论
4 结论



本文编号：3238747