丁苯酞对ALS模型小鼠雄激素受体表达的影响

发布时间：2017-04-24 14:15

  本文关键词：丁苯酞对ALS模型小鼠雄激素受体表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：肌萎缩侧索硬化（amotrophic lateral sclerosis，ALS）是神经系统的变性疾病，缓慢起病，选择性累及脑和脊髓中的运动神经元，表现为进行性加重的肌肉无力、萎缩，其中90%以上病例为散发，10%左右为家族性[1]。其发病机制尚不清楚，一般认为与谷氨酸毒性，氧化应激，细胞骨架异常，轴浆运输障碍,神经炎性反应等多种病因相关。目前，除利鲁唑可延缓其疾病进展外，缺乏有效治疗，迄今仍缺乏有效的治疗方法。 性激素是指由动物的性腺，以及胎盘、肾上腺皮质网状带等组织合成的甾体激素。雌性动物卵巢主要分泌两种性激素，雌激素与孕激素，其中雌二醇的活性最强，雌二醇我们知道是最重要的雌激素，在神经组织展示了很多不同的作用如神经营养作用和神经保护作用，雌酮及雌三醇为其代谢转化物。雄性动物睾丸主要分泌以睾酮为主的雄激素。雄激素可以通过作用于雄激素的受体或通过芳香化酶转化为雌激素起保护作用。这种转化在中枢神经系统中已经证明与脑的性分化有重要关系。神经系统变性疾病受很多因素的影响如环境、遗传、性别差异等，其中性别差异受到越来越多的重视。 丁苯酞（dl-3n-butyphthalide, NBP）是我国心脑血管领域中第一个拥有自主知识产权的新药，从芹菜种籽中分离出的有效成分，相对分子质量为190.24，具有多种神经保护功能，可直接通过血-脑屏障，重构缺血区微循环，保护线粒体免受损伤，改善能量代谢等。研究证实其可以明显改善血管性痴呆患者的症状，提高其血清内SOD的活性并降低MDA的含量，从而减少氧化应激。近来有研究认为丁苯酞对神经系统变性疾病也有一定疗效。 本实验通过观察丁苯酞对家族性肌萎缩侧索硬化模型hSOD1~(G93A)转基因鼠生存期和终末期各组小鼠脊髓前角运动神经元数目及脊髓前角雄激素受体的表达，旨在探讨丁苯酞对hSOD1~(G93A)转基因鼠的作用及其神经保护机制。 方法： 1动物分组及给药方法 由B6SJL2BTg(SOD12G93A)1Gur/J半合子雄鼠和B6SJLF1/J+/+雌鼠(购自美国Jackson Lab)配种繁殖，SP级，经PCR鉴定出hSOD1~(G93A)阳性的小鼠48只，并随机分为丁苯酞组，安慰剂组和空白对照组，选取同窝hSOD1~(G93A)阴性小鼠作为阴性对照组，每组12只，雌雄各半。于小鼠42天起按照180mg/kg剂量的丁苯酞对丁苯酞组小鼠进行灌胃，安慰剂组给予同等量（10ml/kg）的玉米油，同样采用灌胃方法，一天一次。空白及阴性对照组自由摄取水。 2生存期的判定 将小鼠侧卧位放置在平板上，如其在30秒内不能翻身，判定为死亡，该天记录为小鼠死亡时间，生存期为小鼠从出生到死亡的天数。 3.1HE染色 用10%水合氯醛将小鼠麻醉后，心脏灌注4%多聚甲醛固定20min，取小鼠脊髓腰段以4%多聚甲醛固定48h，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，常规组织切片。5μm厚的石蜡切片应用HE染色，观察脊髓前角神经元存活情况。 3.2免疫组化 用10%水合氯醛将小鼠麻醉后，心脏灌注4%多聚甲醛固定20min，快速取出小鼠脊髓腰段以4%多聚甲醛固定48h，石蜡切片25μm厚，免疫组织化学法观察髓前角运动神经元雄激素受体的表达分布。每只小鼠取5张切片，每张切片采集脊髓前角左右2个视野，200倍镜下观察，计数位于脊髓中央管后缘腹侧的脊髓前角内轮廓染色清晰的、直径＞25μm的神经细胞，取单侧脊髓前角运动神经元计数的平均值进行统计。 4统计学方法 所有数据应用SPSS13.0软件进行统计学处理，生存时间采用Kaplane-Meier(K-M)生存曲线进行统计分析，计量资料应用x±s表示，生化指标应用ANOVA进行方差分析。P0.05有统计学意义。 结果: 1生存期 丁苯酞组生存期为135.25±2.111天，安慰剂组为124.833±1.492天，空白对照组生存期为122.579±1.373天，丁苯酞组与安慰剂组相比，P=0.000，丁苯酞组与空白对照组相比，P=0.000，均具有统计学差异。其中丁苯酞组雄性hSOD1~(G93A)转基因小鼠生存期为（139.00±2.573天）比雌性的hSOD1~(G93A)转基因小鼠生存期（130.00±1.924天）长，P=0.000，具有统计学差异。 2HE染色 HE染色结果显示，终末期，残存运动神经元数量丁苯酞组为9.47±2.446，安慰剂组、空白对照组与阴性对照组分别为4.67±1.175、4.47±1.125、23.53±2.2，丁苯酞组与安慰剂组相比，P=0.000，与阴性对照组相比P=0.000，据有统计学差异。其中丁苯酞组雄性hSOD1~(G93A)转基因小鼠残存运动神经元数目为11.57±0.976，雌性hSOD1~(G93A)转基因小鼠残存神经元数目为7.63±1.685，相比P=0.00，具有统计学差异。 3免疫组化 免疫组化结果显示，，丁苯酞治疗组AR阳性的神经元数量为5.87±1.598，安慰剂组、空白对照组与阴性对照组分别为2.93±1.1、3.00±1.134、17.40±1.765。丁苯酞治疗组与安慰剂相比，P=0.000，有统计学差异。其中丁苯酞组雄性hSOD1~(G93A)转基因小鼠AR阳性的神经元数目为6.75±1.282，雌性hSOD1~(G93A)转基因小鼠AR阳性的神经元数目为4.86±1.345，P=0.015，具有统计学差异。在丁苯酞治疗组雄性转基因小鼠脊髓前角神经元内可见雄激素受体表达较多，胞浆内有较强的免疫着色，而在安慰剂组脊髓组织中雄激素受体的表达较少，着色较弱。而且在丁苯酞组内雄性转基因小鼠的脊髓组织中雄激素受体的表达较雌性转基因小鼠强。 结论：丁苯酞可以延长hSOD1~(G93A)转基因小鼠的生存期，而且雄性hSOD1~(G93A)转基因小鼠比雌性的hSOD1~(G93A)转基因小鼠生存期长。丁苯酞可能通过雄激素受体起保护作用，而且丁苯酞组hSOD1~(G93A)转基因小鼠的生存期的性别差异可能与雄激素受体在脊髓前角运动神经元的表达有关。
【关键词】：丁苯酞 肌萎缩侧索硬化 hSOD1~(G93A)转基因小鼠 雄激素受体
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R744
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11
• 材料与方法11-16
• 结果16-18
• 附图18-22
• 附表22-24
• 讨论24-26
• 结论26
• 参考文献26-29
• 综述 性激素与神经系统变性疾病29-39
• 参考文献33-39
• 致谢39-40
• 个人简历40

【参考文献】

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1 崔丽英,李舜伟,吕传真,董强,董鹏,史朗峰,黄鉴政,毛善英,张朝东,曹云鹏,聂莹雪,王维治,梁庆成,杨春晓,董为伟,李光勤,彭国光,罗祖明,何俐,万琪,韩军良,黄如训,李玲,李承宴,蒙振中;恩必普软胶囊治疗中度急性缺血性卒中的多中心开放临床研究[J];中国脑血管病杂志;2005年03期

2 崔丽英,刘秀琴,朱以诚,樊东升,谢汝萍,沈杨,张微微,杨新平,哈志远,李玲,冯亚青,李舜伟;dl-3-正丁基苯酞治疗中度急性缺血性脑卒中的多中心、随机、双盲和安慰剂对照研究[J];中华神经科杂志;2005年04期

3 刘建国;戚晓昆;姚生;熊斌;邱峰;;丁苯酞治疗神经变性病及遗传性疾病的疗效观察[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2008年06期

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本文编号：324360