利用CRISPR/Cas系统快速高效构建血友病乙小鼠模型

发布时间：2021-07-02 07:11

　　血友病乙是由凝血因子Ⅸ（FactorⅨ,FⅨ）缺乏或功能缺陷导致的出血性疾病,为伴X染色体隐性遗传病。小鼠模型对于血友病乙的研究具有十分重要的意义,而基因组编辑技术又为小鼠模型的构建提供了一种快捷而且高效的途径。本文利用CRISPR/Cas系统,在小鼠FⅨ基因第8外显子上选择靶位点,将Cas9 m RNA和带有靶位点的sg RNA显微注射到C57BL/6品系小鼠的受精卵中,获得基因修饰的小鼠。利用高分辨率熔解曲线分析（High resolution melting,HRM）技术进行精确基因分型,并通过测序验证,在60只小鼠中,总共有51只小鼠的靶位点发生了突变,突变率高达85%,其中雄鼠的突变率为79.5%,雌鼠的突变率为95.2%;未检测到非目标位置的基因编辑脱靶。凝血活性实验显示,突变小鼠的FⅨ活性值（FactorⅨcoagulant activity,FⅨ:C）是非突变小鼠的6.82%,大大低于非突变小鼠,表明突变小鼠的凝血活性缺失。本研究表明,利用CRISPR/Cas系统成功构建了人类血友病乙遗传病小鼠模型。 

【文章来源】：遗传. 2015,37(11)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

HA：非突杂合突变位点进行鼠基因组的熔解曲型基因组HRM基因分型突变小鼠的熔解变小鼠的熔解曲行HRMA检测得组(未混入野生型曲线，红色代表

【参考文献】：
期刊论文
[1]应用HRM技术对CYP2C19*2和CYP2C19*3进行双重SNP分型[J]. 曹春鸽,孙海燕,周芳芳,王诗铭,陈红岩,卢大儒.  遗传. 2013(07)



本文编号：3260007