中国人IL-12基因的克

发布时间：2021-07-03 09:26

　　IL-12通过增强T细胞和NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性而在先天性免疫和获得性抗肿瘤免疫中均发挥着重要作用，树突状细胞（DC）是机体内一种有效的抗原提呈细胞。本研究利用已知的分别能被CD4⁺T和CD8⁺T淋巴细胞所识别的抗原多肽表位，观察IL-12基因转染入DC后，在DC呈递抗原局部较高水平的IL-12表达，对Th细胞发育分化和CTL功能的影响，以探讨IL-12基因转染DC在负载上相应肿瘤抗原后作为治疗性肿瘤疫苗的可能性。采用RT-PCR从脐血DC中克隆了人IL-12p40基因。序列分析显示第210位密码子具有独特的序列特征，是GCC（Ala）而非GTC（Val）。利用此基因与NKSFp35（购自ATCC）构建人了人IL-12基因的逆转录病毒双亚基共表达载体，在其转导细胞后表达出了具有生物学活性的IL-12，Western Blot分析显示有特异性蛋白条带。提示IL-12p40基因可能存在着多态性。采用脂质体转染技术，将这一表达载体转染经FIt-3L、SCF和GM-CSF刺激后进入到细胞增殖周期中的DC前体细胞，随后采用GM-CSF、IL-4和... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：82 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

RT一PCR扩增人IL一12妇ocNDA片段的电泳图谱

FIG.l一7:ConstruetionofreeombinanthumanIL一12ertroviralbieistronieveetorPL35P40SN图1一7:重组人IL一12逆转录病毒双亚基共表达载体的构建1.InsertionofP35:PLXPXSNwaseutbyEeoRI，blunt一endedbyKleno，wandtheneleavedbyNotl.P35NKSFwaseutbySall，blunt一endedbyKleno，wandtlleneleavedbyNotltoreleasedthe1.3kbP35genetobeligatedintothesitesuPstreamofIRES.2.InsertionofP40:ThereeombinantveetoreontainingP35wascutbySall，blunt一endedbyKleno，wandthenelevaedbyXhol.PhDCP40waseutbyBamHI，blunt一endedbyKIeno，wandtheneleavedbyXlloltoreleasedtheP40rfagment，whieh15tllenligatedintothesitesdownstreamofIREStoeomPletetheeonstruetion.25

trietionnadPCRProfiieofreeombinnat人IL一12基因表达载体的PCR及酶pressionvectorpLxpxSNdigestedbyEthumnaIL一12exPressionveetorPLbp，，a76obps，a’25obp，，anda内obpseationofPL35P40SNbyusingsPeeifie0bPsbnadcationofPL35P40SNbyusingsPeeifie0bPsbanddlll+EeoRI

【参考文献】：
期刊论文
[1]北方汉族人群HLA-A2亚型分布及p53的合成肽体外诱导CTL反应[J]. 侯亚非,孙宗棠,曲春枫,吴志远.  中华微生物学和免疫学杂志. 1999(01)
[2]人IL-12的克隆、表达及生物活性的鉴定[J]. 曲春枫,孙宗棠.  中国免疫学杂志. 1999(01)
[3]白细胞介素12基因转染抑制B16细胞成瘤性及转移性的研究[J]. 付坚,郑杰,方伟岗,吴秉铨,吴晓由,江峰.  中华医学杂志. 1998(08)



本文编号：3262314