针对MEKK3在血管生成中所起到的调控作用的相关机制研究

发布时间：2021-07-04 20:04

　　目的：MEKK3（有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶）是MAP3K家族的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,表达于哺乳类动物的各种组织中。MEKK3在小鼠的早期胚胎发育中有着至关重要的作用。MEKK3敲除可以造成小鼠早期胚胎因血管发育不全以及卵黄囊结构破损而死亡,提示我们MEKK3可以调节血管生成。本课题旨在研究MEKK3在血管生成中所起到的调控作用,并进一步对其机制加以探讨。方法：在体实验研究运用了条件性和诱导性MEKK3基因敲除小鼠,通过组织的形态观察和免疫组化,探知MEKK3基因在血管生成中的功能。体外的细胞生化试验,包括细胞培养、RT-PCR、Western Blot等,是研究MEKK3介导的信号传导通路影响血管生成的手段。结果：MEKK3缺失可以导致血管生成受损：（1）MEKK3缺失时,R-Smad连接域的磷酸化水平下降,BMP9/TGF-β以及Notch信号传导通路被激活,其下游靶基因（Ids, Hes和Hey）的表达上调。血管内皮顶细胞的功能选择因此受限,导致血管生长延伸缓慢和分支下潜困难；（2）MEKK3缺失时,β1-Integrin-PKC/Par3/Par6信号转导通路受到干扰,造... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：62 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
综述
    参考文献
1 MEKK3调节血管出芽(vascular sprouting)
    1.1 实验方法
        1.1.1 实验抗体
        1.1.2 实验动物
        1.1.3 视网膜免疫组化染色
        1.1.4 细胞培养和转染
        1.1.5 定量RT-PCR
        1.1.6 免疫印迹Western Blot
        1.1.7 统计分析
    1.2 实验结果与分析
        1.2.1 MEKK3基因敲除能引发血管生成缺陷
        1.2.2 MEKK3缺失所引起的血管生长受限主要是因为其对于顶细胞功能的影响
        1.2.3 MEKK3对顶细胞功能的调节是通过BMP9信号通路和Notch信号通路所介导的
        1.2.4 内皮细胞中MEKK3介导R-Smad的序列中间连接域的磷酸化并阻碍Smad的转录活性
    1.3 结论
2 MEKK3调节血管分支的形成(vascular branching)
    2.1 实验方法
        2.1.1 实验抗体
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 视网膜免疫组化染色
        2.1.4 小鼠眼球后注射荧光标记的Dextran
        2.1.5 Sulfo-NHS-biotin脑血管显色
        2.1.6 统计分析
    2.2 实验结果与分析
        2.2.1 MEKK3基因敲除会诱发脑出血
        2.2.2 MEKK3缺失导致脑血管形态异常
        2.2.3 MEKK3缺失会导致血管的血液运输功能受损
        2.2.4 MEKK3对脑血管功能的影响是因为内皮细胞MEKK3的缺失
        2.2.5 内皮细胞MEKK3缺失所造成的脑血管形态和功能丧失是因为管腔形成的缺陷
        2.2.6 从内皮细胞中分离内源性的MEKK3复合物
    2.3 结论
参考文献
攻读学位期间主要的研究成果目录
致谢



本文编号：3265448