白香丹胶囊对PMDD肝气逆证模型大鼠学习记忆能力的影响及其机制研究

发布时间：2017-04-25 21:19

  本文关键词：白香丹胶囊对PMDD肝气逆证模型大鼠学习记忆能力的影响及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：以PMDD肝气逆证大鼠模型为载体考察该病证及白香丹胶囊对模型大鼠学习记忆能力的影响，探讨模型行为学表现下该病证对学习记忆功能的损伤及白香丹胶囊的干预效应。 以模型为载体考察病证及白香丹胶囊对动物海马脑区NMDAR1受体亚基的分布与表达的影响，探讨PMDD肝气逆证的发病机制和白香丹胶囊干预该病症的作用机理。 方法：⑴模型制备与评价：采用情志刺激为主多因素分段刺激法，制备PMDD肝气逆证大鼠模型，并采用白香丹胶囊、氟西汀进行药物干预。采用旷场实验对PMDD肝气逆证模型大鼠进行行为学检测，评价模型制备是否成功。 ⑵大鼠学习记忆功能评价：采用Morris水迷宫实验、Y迷宫实验、物体识别实验对PMDD肝气逆证模型动物空间学习记忆能力和非空间学习记忆能力进行检测； ⑶大鼠的微观指标检测：采用免疫荧光化学方法（IF）和免疫印迹法（westernblot）检测正常组大鼠、PMDD肝气逆证模型组大鼠、白香丹给药组大鼠、氟西汀给药组大鼠海马NMDAR1含量变化，以及在CA1、CA3中NMDAR1受体亚基的分布情况。 结果：⑴模型制备与评价：旷场试验：与正常组大鼠相比，模型组大鼠总路程显著增加（p0.05），进入中央区次数及中央区停留时间均显著降低（p0.01，p0.01）；与模型组相比较，白香丹组大鼠总路程显著下降（p0.05），中央区停留时间及进入中央区次数均显著升高（p0.05，p0.05）；氟西汀组大鼠总路程显著下降（p0.05）。 ⑵大鼠学习记忆功能评价：与正常组相比，模型组大鼠DI明显下降（p0.05），白香丹组大鼠DI显著升高（p0.05）；定位航行阶段，模型组大鼠在第2、4天逃避潜伏期显著上升（p0.05，p0.05）；与模型组相比，白香丹组大鼠在第2、4天的逃避潜伏期明显降低（p0.05，p0.05）；空间探索阶段，与正常组相比，，模型组大鼠逃避潜伏期显著上升(p0.05)，而平台穿越次数明显减少(p0.05)，与模型组相比，白香丹组大鼠平台穿越次数显著增多(p0.05)。 ⑶大鼠的微观指标检测结果：免疫荧光标记结果显示，与正常组大鼠相比，模型组大鼠海马CA1、CA3区细胞均排列稀疏杂乱，与模型组相比，白香丹组和氟西汀组大鼠海马CA1、CA3区细胞分布排列无异常。免疫印记结果显示，与正常组大鼠相比，模型组和氟西汀组NMDAR1蛋白表达含量显著降低（p0.0001，p0.001）；与模型组相比较，白香丹组NMDAR1蛋白水平明显升高（p0.0001）；与白香丹组相比较，氟西汀组NMDAR1蛋白水平显著降低（p0.05）。 结论：⑴PMDD肝气逆证模型学习记忆能力存在缺陷，白香丹胶囊能够纠正模型大鼠的学习记忆能力缺陷，且治疗效果可能优于氟西汀。 ⑵PMDD肝气逆证的发生可引起大鼠海马CA1、CA3区神经细胞减少及NMDAR1受体亚基的表达活性降低，可能是PMDD肝气逆证发生的机制之一；白香丹胶囊可以有效纠正模型大鼠海马神经细胞变化及其NMDAR1受体亚基表达下降的状态，这可能是该药治疗PMDD肝气逆证的作用途径之一。
【关键词】：白香丹胶囊 肝气逆证 NMDAR1 学习记忆 认知 海马
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R285.5
【目录】：

• 提要4-6
• Abstract6-13
• 引言13-15
• 研究一 PMDD 肝气逆证大鼠模型制备及其学习记忆能力宏观行为学检测15-29
• 1 实验材料15
• 1.1 实验动物15
• 1.2 实验药品15
• 1.3 实验仪器15
• 2 实验方法15-20
• 2.1 模型制备15-17
• 2.1.1 实验动物筛选15-16
• 2.1.2 实验动物分组16
• 2.1.3 模型制备16-17
• 2.1.4 给药剂量及方法17
• 2.2 行为学数据采集及测定17-19
• 2.2.1 旷场实验（open filed OFT）17
• 2.2.2 Y 迷宫（YMaze）17
• 2.2.3 Morris 水迷宫（Morris water maze MWM）17-18
• 2.2.4 新物体识别实验18-19
• 2.3 统计处理19-20
• 结果20-24
• 1 旷场试验20-21
• 2 大鼠学习记忆能力行为学指标表现21-24
• 2.1 Y 迷宫21
• 2.2 物体识别实验21-22
• 2.3 水迷宫22-24
• 讨论24-28
• 1 PMDD 肝气逆证大鼠模型24-26
• 1.1 关于 PMDD 大鼠肝气逆证大鼠模型制备24
• 1.2 关于 PMDD 大鼠肝气逆证大鼠模型评价24-26
• 1.2.1 关于大鼠旷场试验实验结果分析25-26
• 2 PMDD 肝气逆证模型大鼠的学习记忆能力行为学分析26-27
• 2.1 水迷宫26-27
• 2.2 新物体识别实验27
• 2.3 Y 迷宫27
• 3 行为学方法检测大鼠学习记忆能力的意义27-28
• 小结28-29
• 研究二 大鼠海马脑区 NMDAR1 受体分布与表达29-48
• 1.材料29-32
• 1.1 动物29
• 1.2 药品及试剂29
• 1.2.1 模型制备药品与试剂29
• 1.2.2 免疫荧光实验药品与试剂29
• 1.2.3 免疫印记药品与试剂29
• 1.3 实验仪器29-30
• 1.3.1 免疫荧光实验仪器29-30
• 1.3.2 免疫印记实验仪器30
• 1.4 试剂配制30-32
• 1.4.1 免疫荧光30-31
• 1.4.2 免疫印迹试剂配制31-32
• 2 实验方法32-39
• 2.1 实验模型制备及给药方法32
• 2.2 免疫荧光实验32-33
• 2.2.1 大鼠脑组织取材及脑组织切片的制备32
• 2.2.2 洗涤脱水32-33
• 2.2.3 透明浸蜡33
• 2.2.4 石蜡包埋33
• 2.2.5 石蜡切片33
• 2.3 NMDAR1 受体的免疫荧光标记实验33-34
• 2.3.1 石蜡切片脱蜡至水33-34
• 2.3.2 微波热抗原修复34
• 2.3.3 山羊血清封闭34
• 2.3.4 一抗、二抗孵育（Antibody incubation）34
• 2.4 免疫荧光切片检测及数据分析34
• 2.5 免疫印记化学实验34-35
• 2.5.1 组织取材34-35
• 2.6 蛋白的提取和测定35
• 2.6.1 蛋白的提取35
• 2.6.2. 蛋白标准曲线制定及蛋白测定35
• 2.6.3 检测样品蛋白含量35
• 2.7 免疫印记化学实验35-38
• 2.7.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳35-36
• 2.7.2 转膜36-37
• 2.7.3 杂交反应37
• 2.7.4 显影与图像分析37-38
• 2.8 统计方法38-39
• 结果39-42
• 1 各组大鼠海马脑区 NMDAR1 受体的分布及神经元细胞形态变化39-40
• 2 海马神经细胞中 NMDAR1 蛋白表达水平检测结果40-42
• 讨论42-48
• 1 海马42-43
• 1.1 海马与情绪42
• 1.2 海马与学习记忆42
• 1.3 应激损伤大鼠海马神经元形态结构42-43
• 2 NMDAR1 受体在海马脑区分布与表达43-45
• 2.1 NMDAR1 受体结构43
• 2.2 NMDA 受体变化与学习记忆43-44
• 2.4 NMDAR1 受体在海马及突触中的分布44-45
• 2.5 NMDAR1 受体在海马脑区表达45
• 3 白香丹胶囊作用分析45-47
• 3.1 白香丹胶囊脑中枢作用分析46
• 3.2 白香丹胶囊对 PMDD 肝气逆证模型大鼠学习记忆功能的调节作用46-47
• 小结47-48
• 研究特色与不足48-49
• 1 本课题研究特色48
• 2 本课题研究不足48-49
• 结语49-50
• 综述50-55
• 参考文献55-65
• 致谢65-66
• 附录：缩写词表66-67
• 论文著作67-68
• 详细摘要68-71

【参考文献】

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本文编号：327121