HCV核心蛋白对Huh7细胞Wnt/β-Catenin/TCF信号通路及细胞凋亡的影响
发布时间：2021-07-09 16:42
目的：研究丙型肝炎病毒（hepatitis C virus, HCV）1b基因型核心蛋白（core）对Huh7细胞Wnt/β-catenin/TCF信号通路及细胞凋亡的影响，以初步探索1b基因型HCV核心蛋白与Wnt/β-catenin/TCF信号通路及细胞凋亡的关系。方法：通过脂质体介导将重组后的真核表达载体pcDNA3.1（-）/HCV-1b-core瞬时转染Hun7细胞（pcDNA3.1（-）-C组），RT-PCR及Western Blot检测其mRNA和蛋白的表达；MTT、RT-PCR、Western Blot、双荧光素酶报告系统分别检测成功转染pcDNA3.1（-）/HCV-1b-core后Huh7细胞的增殖、β-catenin mRNA和蛋白的表达，以及TCF转录因子活性；流式细胞术和Western Blot分别检测血清饥饿诱导条件下成功转染pcDNA3.1（-）/HCV-1b-core Huh7细胞的凋亡和Caspase-3的表达；以转染空质粒的pcDNA3.1（-）组、空白对照组Huh7细胞作为对照。结果：1、重组质粒pcDNA3.1（-）/HCV-1b-core瞬时转...
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RT-PCR鉴定HCVcoremRNA的表达
图 1：RT-PCR 鉴定 HCVcore mRNA 的表达注：1.pcDNA3.1(-)-C 组 2.pcDNA3.1(-)组 3.空白对照组真核表达载体 pcDNA3.1(-)/HCV-1b-core 成功转染 Huh7 细胞后，RT-PCR显示空白对照组、pcDNA3.1(-)组、pcDNA3.1(-)-C 组 β-catenin mRNA 相对量分别为：0.326±0.017、0.362±0.029、0.625±0.023，统计显示三组间 β-cateRNA 相对表达量方差齐（P >0.1），β-catenin mRNA 相对表达量与 pcDNA3.1和空白对照组相比，差异有统计学意义（P <0.01）,表明 HCV core 转染 Hu胞后能够上调 β-catenin mRNA 的表达水平(如图 2)。
.MTT 法检测各组细胞增殖MTT 法于 12h、24h、36h、48h、60h、72h 不同时间点测定空白对照组、cDNA3.1(-)组、pcDNA3.1(-)-C 组相应的 OD 值(如表 1)，根据 OD 值绘制各组uh7 细胞生长曲线(如图 3)。表 1 MTT 法检测不同时间点各组细胞 OD 值（X±S）组别 12h 24h 36h 48h 60h 72h空白对照组 0.25±0.04 0.31±0.02 0.45±0.05 0.54±0.03 0.65±0.01 0.72±0.02pcDNA3.1(-)组 0.27±0.06 0.30±0.03 0.42±0.05 0.53±0.04 0.63±0.03 0.69±0.06cDNA3.1(-)-C 组 0.29±0.03 0.45±0.04* 0.62±0.04* 0.75±0.05* 0.86±0.02* 0.95±0.04*注：同一时间点，与 pcDNA3.1(-)组和空白对照组相比，*P<0.01。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Animal models for the study of hepatitis C virus infection and replication[J]. Kristin L MacArthur,Catherine H Wu,George Y Wu. World Journal of Gastroenterology. 2012(23)
[2]树鼩驯养繁殖实验动物标准及丙型肝炎动物模型技术平台建设的探讨[J]. 孙晓梅,夏雪山,代解杰. 中国实验动物学报. 2011(02)
[3]免疫抑制剂地塞米松可明显延长乙型肝炎病毒抗原在水动力法转染HBV小鼠模型中的表达[J]. 郭燕菊,王文,孙世惠,曾道炳,赵光宇,于虹,郭彦,谭文杰,卢实春,周育森. 病毒学报. 2010(01)
[4]树鮈资源的开发利用与标准化研究——我国实验动物资源建设发展战略探讨[J]. 角建林,刘汝文,陈丽玲,李波,何保丽,郑红,沈培清. 中国比较医学杂志. 2009(07)
[5]树鼩在医学生物学中的应用[J]. 徐新平,陈红波,贲昆龙. 中国实验动物学报. 2005(03)
[6]丙型肝炎病毒核心蛋白对细胞凋亡的影响[J]. 刘重阳,刘为纹,陈东风,杨建民,房殿春. 世界华人消化杂志. 2001(10)
[7]丙型肝炎病毒感染成年树的实验研究[J]. 刘志,毛青,王宇明,李奇芬. 第三军医大学学报. 1998(06)
[8]成年树实验感染丙型肝炎病毒的初步研究[J]. 王海平,周永兴,姚志强,洪沙,李光玉. 第四军医大学学报. 1997(04)
博士论文
[1]免疫抑制剂处理建立HBV持续复制小鼠模型及其免疫学机制的研究[D]. 黄顺梅.华中科技大学 2012
本文编号：3274108
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RT-PCR鉴定HCVcoremRNA的表达
图 1：RT-PCR 鉴定 HCVcore mRNA 的表达注：1.pcDNA3.1(-)-C 组 2.pcDNA3.1(-)组 3.空白对照组真核表达载体 pcDNA3.1(-)/HCV-1b-core 成功转染 Huh7 细胞后，RT-PCR显示空白对照组、pcDNA3.1(-)组、pcDNA3.1(-)-C 组 β-catenin mRNA 相对量分别为：0.326±0.017、0.362±0.029、0.625±0.023，统计显示三组间 β-cateRNA 相对表达量方差齐（P >0.1），β-catenin mRNA 相对表达量与 pcDNA3.1和空白对照组相比，差异有统计学意义（P <0.01）,表明 HCV core 转染 Hu胞后能够上调 β-catenin mRNA 的表达水平(如图 2)。
.MTT 法检测各组细胞增殖MTT 法于 12h、24h、36h、48h、60h、72h 不同时间点测定空白对照组、cDNA3.1(-)组、pcDNA3.1(-)-C 组相应的 OD 值(如表 1)，根据 OD 值绘制各组uh7 细胞生长曲线(如图 3)。表 1 MTT 法检测不同时间点各组细胞 OD 值（X±S）组别 12h 24h 36h 48h 60h 72h空白对照组 0.25±0.04 0.31±0.02 0.45±0.05 0.54±0.03 0.65±0.01 0.72±0.02pcDNA3.1(-)组 0.27±0.06 0.30±0.03 0.42±0.05 0.53±0.04 0.63±0.03 0.69±0.06cDNA3.1(-)-C 组 0.29±0.03 0.45±0.04* 0.62±0.04* 0.75±0.05* 0.86±0.02* 0.95±0.04*注：同一时间点，与 pcDNA3.1(-)组和空白对照组相比，*P<0.01。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Animal models for the study of hepatitis C virus infection and replication[J]. Kristin L MacArthur,Catherine H Wu,George Y Wu. World Journal of Gastroenterology. 2012(23)
[2]树鼩驯养繁殖实验动物标准及丙型肝炎动物模型技术平台建设的探讨[J]. 孙晓梅,夏雪山,代解杰. 中国实验动物学报. 2011(02)
[3]免疫抑制剂地塞米松可明显延长乙型肝炎病毒抗原在水动力法转染HBV小鼠模型中的表达[J]. 郭燕菊,王文,孙世惠,曾道炳,赵光宇,于虹,郭彦,谭文杰,卢实春,周育森. 病毒学报. 2010(01)
[4]树鮈资源的开发利用与标准化研究——我国实验动物资源建设发展战略探讨[J]. 角建林,刘汝文,陈丽玲,李波,何保丽,郑红,沈培清. 中国比较医学杂志. 2009(07)
[5]树鼩在医学生物学中的应用[J]. 徐新平,陈红波,贲昆龙. 中国实验动物学报. 2005(03)
[6]丙型肝炎病毒核心蛋白对细胞凋亡的影响[J]. 刘重阳,刘为纹,陈东风,杨建民,房殿春. 世界华人消化杂志. 2001(10)
[7]丙型肝炎病毒感染成年树的实验研究[J]. 刘志,毛青,王宇明,李奇芬. 第三军医大学学报. 1998(06)
[8]成年树实验感染丙型肝炎病毒的初步研究[J]. 王海平,周永兴,姚志强,洪沙,李光玉. 第四军医大学学报. 1997(04)
博士论文
[1]免疫抑制剂处理建立HBV持续复制小鼠模型及其免疫学机制的研究[D]. 黄顺梅.华中科技大学 2012
本文编号：3274108
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shiyanyixue/3274108.html
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