Cohn FⅠ及FⅠ+Ⅲ中纤维蛋白原的纯化与鉴定

发布时间：2021-07-14 00:03

　　人纤维蛋白原（fibrinogen,Fg）即凝血因子Ⅰ,是血浆中含量最高的凝血因子,在凝血级联反应的最后一步,激活后的凝血酶使Fg转变为纤维蛋白,发挥止血功能。Fg是用于外科止血非常有效的生物胶的主要成分。本研究以正常人血浆低温乙醇法分离的Cohn FⅠ和Cohn FⅠ+Ⅲ（组分Ⅰ及组分Ⅰ+Ⅲ沉淀）为原材料,通过甘氨酸沉淀后,分别用离子交换与疏水层析两种方法提取Fg。首先对原材料（FⅠP及FⅠ+ⅢP）的溶解条件、Fg的保存缓冲液进行了摸索和优化,溶解时原材料（FⅠP及FⅠ+ⅢP）与缓冲液A的比例为3～4g:30ml,溶解时间为90min;Fg的保存缓冲液为pH范围6.8～7.2、NaCl浓度范围0.6～0.8mol/L的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液,实验结果表明保存缓冲液在24h内维持Fg活性效果明显。同时对层析前样品的活性稳定时间进行了检测,结果表明为维持Fg的活性,层析前样品处理完成后应立即上层析柱。其次对FⅠP及FⅠ+ⅢP经甘氨酸沉淀得到的Fg粗制品分别进行了离子交换和疏水层析纯化条件的优化,离子交换剂先后使用过两种,Q Sepharose HP（GE）,Q Sepharose XL... 

【文章来源】：武汉生物制品研究所湖北省

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

RGPS不同保存时间和环境的SDS-PAGE（还原）分析（FⅠP）

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.00.040.060.080.100.120.14Proteinconcentration(mg/ml)Storagetime(Day)Sample-SBSample-NOSB图 6 RGPS（FⅠ+ⅢP）稳定时间折线图Fig. 6. Curve of RGPS（FⅠ+ⅢP）shelf timeSample-SB：用样品保存液保存的样品；Sample-NOSB：用 Buffer A 保存的样品

图 9 QSHP 分离 Fg 收集的样品 SDS-PAGE（还原）分析（FⅠPactions analysis of Fg preparation with QSHP by reduced SDS-PAGES；3，穿流峰 1；4，穿流峰 2；5，洗脱峰B20；6，洗脱峰B308，洗脱峰B100；9，GPS；M，Maker；银染于 QSHP 柱，经阶段洗脱后，结果见图 8，将收集 显示目的蛋白主要存在于穿流峰1（泳道 3），穿 7），综合图 8 各峰的面积和图 9 目的蛋白的峰（泳道 3，4）中。优化及 Fg 制备制备 Fg于 BS4FF 柱，经 11 个柱体积线性梯度洗脱后，的样品 SDS-PAGE，结果见图 11，凝固活力、纯

【参考文献】：
期刊论文
[1]纤维蛋白原基因多态性研究进展[J]. 林威,陈群.  心肺血管病杂志. 2009(01)
[2]纤维蛋白原测定方法的探讨及临床应用[J]. 苏加云.  检验医学与临床. 2008(23)
[3]纤维蛋白原及其检测进展[J]. 段樱,刘树业.  哈尔滨医药. 2008(01)
[4]医用粘合剂在眼科手术中的应用[J]. 周鼎,于永斌.  哈尔滨医科大学学报. 2008(01)
[5]纤维蛋白基生物医用材料[J]. 顾其胜,王佳宁.  中国修复重建外科杂志. 2008(02)
[6]纤维蛋白胶—抗肿瘤药物缓释系统的临床应用进展[J]. 商弘,杨宇.  现代生物医学进展. 2007(10)
[7]Bio-oss结合纤维蛋白胶修复犬下颌骨缺损[J]. 田刚,徐晓刚,周中华.  第二军医大学学报. 2007(06)
[8]骨形态发生蛋白/纤维蛋白胶修复功能实验研究[J]. 符万奎.  中国热带医学. 2006(12)
[9]免疫比浊法和Clauss法检测纤维蛋白原的结果比较[J]. 黄海樱,陈波.  中国热带医学. 2006(01)
[10]冻干人纤维蛋白胶在心血管外科手术中的应用[J]. 陈安清,王哲,王春生,赵强,徐德民.  药学实践杂志. 2005(06)



本文编号：3282988