OVX小鼠和正常小鼠源于脾多潜能干细胞的破骨细胞样细胞体外培养及其基因表达差异显示研究

发布时间：2021-07-18 19:03

　　骨重建是骨组织进行修复的重要手段，是一个偶联过程，包括骨吸收和随后进行的骨形成两部分。破骨细胞（OC）是骨吸收的主要细胞，是由单核细胞融合而成的，来源于单核—巨噬细胞造血干细胞系。破骨细胞为终末分化细胞，数量极少，生存时间有限，目前尚无破骨细胞株可利用。目前学术界公认，脾多潜能干细胞诱导破骨细胞样细胞体外培养法是研究破骨细胞形成的有效方法。本试验通过5—氟尿嘧啶刺激脾造血干细胞聚集，进而通过IL-3、IL-6作用形成细胞集落。在粒细胞、巨噬细胞-集落刺激因子（GM-CSF）的作用下，脾多潜能干细胞进一步分化，然后在1，25（OH）₂VitD₃和地塞米松的作用下，诱导形成较大数量的、具有破骨细胞生物特征的破骨细胞样细胞，这些细胞TRAP染色阳性，与骨片共同培养时，经融合形成多核细胞后可吸收骨形成骨陷窝。为今后对于破骨细胞的研究提供了较好的细胞模型。 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：98 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

培养7天的OLC集落x100倍

落加入GM一CSF，7一10天后可以看到大量的圆形或椭圆形细胞。换用1二，25一(OH)ZVitD:和地塞米松后，可见细胞数目较前相对减少，细胞体积增大，胞浆多核，细胞形态不规则(图2)。破骨细胞样细胞表现为:质膜边缘不规则、有突起和伪足，胞内有数个以上或十几个细胞核，胞浆内可见大小不等的空泡。二.OLC的抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)检查经TRACP染色后，镜下多数多核细胞和单核细胞胞浆染成红色(酸性磷酸酶活性部位形成的红色不溶性沉淀)，经苏木复染后，可以看到胞核成致密的蓝色、圆形，其间可见深蓝色小核仁(图3)。大约80%的细胞TRAP染色后呈阳性反应(图4)。三.OLC扫描电镜结果在骨磨片上可见不同形态和大小的破骨细胞样细胞形成。一些细胞体积相对较小，扁平多角型，形态不规则，无长突起，贴片边缘有少量短而钝的胞质突起。这些细胞大小介于25~43xl3一21微米之间(长径x短径)。另一些细胞附着在骨片表面，体积大小介于127一167x58一117微米之间(图5)。由于一些体积较大细胞在细胞中央部分胞膜无界限可分，而在周边部位可见部分咆膜融合，尚可观察到细胞间隙，因此推断这些体积较大细胞为前述较小细胞融合而成(图6)。而且可以观察到一些细胞尚在融合过程中。融合形成的破骨细胞样细胞外形不规则

经TRACP染色后，镜下多数多核细胞和单核细胞胞浆染成红色(酸性磷酸酶活性部位形成的红色不溶性沉淀)，经苏木复染后，可以看到胞核成致密的蓝色、圆形，其间可见深蓝色小核仁(图3)。大约80%的细胞TRAP染色后呈阳性反应(图4)。三.OLC扫描电镜结果在骨磨片上可见不同形态和大小的破骨细胞样细胞形成。一些细胞体积相对较小，扁平多角型，形态不规则，无长突起，贴片边缘有少量短而钝的胞质突起。这些细胞大小介于25~43xl3一21微米之间(长径x短径)。另一些细胞附着在骨片表面，体积大小介于127一167x58一117微米之间(图5)。由于一些体积较大细胞在细胞中央部分胞膜无界限可分，而在周边部位可见部分咆膜融合，尚可观察到细胞间隙，因此推断这些体积较大细胞为前述较小细胞融合而成(图6)。而且可以观察到一些细胞尚在融合过程中。融合形成的破骨细胞样细胞外形不规则，可见较长突起。


本文编号：3290178