体内外感染BALB/c小鼠HCMV分离株UL83、UL54基因遗传变异的研究

发布时间：2021-07-21 23:24

　　目的将体内外感染BALB/c小鼠人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）分离株UL83、UL54基因进行遗传变异分析,筛选影响病毒跨种属感染的相关基因,为进一步探索其机制提供线索。方法（1）1.45×10⁶ PFU/ml的HCMV AD169株（本室保存）、3×10⁵PFU/ml的山东株（山东医学科学院惠赠）腹腔注射6～8周SPF级BALB/c小鼠1.0ml/只,雌雄各6只作为实验组,同时设立灭活病毒对照组和细胞对照组。一个月后取各组小鼠大脑皮质组织接种人胚胎成纤维细胞（HF）进行病毒分离与鉴定（PCR检测HCMV UL83）、RT-PCR检测大脑组织匀浆中HCMV UL54基因的转录。将从小鼠体内分离到的HCMV病毒命名为体内株（下同）。（2）以MOI=100的HCMVAD169株接种至BALB/c小鼠原代胚胎成纤维细胞（MF）和HF细胞,镜下逐日观察HCMV特征性细胞病变效应（CPE）并传代三次。待出现细胞病变后采用PCR和RT-PCR检测HCMV特异性基因UL83、IE基因的复制和转录。将从MF中分离到的HC... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

小鼠大脑皮质组织病毒分离结果(未染色x100)

安徽医科大学硕士学位论文766bp处有特异性的扩增条带。其他各组在盲传3代后均未发现细胞病变效应，PCR也未检测到特异性条带(图2)。图1小鼠大脑皮质组织病毒分离结果(未染色x100) Fig.1Resultofvirusisolationineerebraleo血 xofmiee(a)正常HF细胞 (a)ThenormalHFcells(b)病变HF细胞 (b)pathologiealHFeells1000b750bP图2小鼠大脑皮质组织病毒分离PCR检测 HCMVUL83基因结果 Fig.2ResultofPCRUL83DNAincerebralcortexofmice泳道1:分子量标准泳道2:阳性对照泳道3:阴性对照泳道 4:HCMVAD169组泳道5:山东株组泳道6:HF细胞对照组泳道7:灭活病毒组 lanel:DL2000MarkerlaneZ:Positiveeontrollane3:negativeeontrollane4:HCMVAD169 lanes:Shandongstralnlane6:HFeelllane7:inactivationgrouP 3.2.2RT-PCR检测大脑皮质组织中 HCMVUL54基因转录产物小鼠大脑皮质组织匀浆 HCMVUL54基因Rl二PCR结果如图3所示。实验组

图3RT-PCR检测小鼠大脑皮质组织中HCMVUL54基因转录Fig.3取sultofRT一pCR讥54罗neineerebraleortexofmi道1:分子量标准道5:山东株组泳道2:阳性对照泳道3:阴性对照泳道6:HF细胞对照组泳道7:泳道4灭活病


本文编号：3295969