SARS冠状病毒检测寡核苷酸基因芯片的研制及应用

发布时间：2021-07-28 10:33

　　SARS冠状病毒（SARS-CoV）感染所引起的严重急性呼吸综合征（SARS），2003年冬春之际在我国以及世界上多个国家和地区的爆发流行，对人类健康、经济发展和社会稳定造成了严重的危害。早期、快速、准确的诊断，对于SARS的预防和隔离至关重要。目前常用的诊断措施包括病毒分离培养、免疫学方法、基于PCR的检测技术等等，但分别存在难以早期诊断、敏感度低、实施困难或假阳性高等缺陷。本课题研究采用基因芯片技术，探索对SARS冠状病毒感染的早期、敏感、准确和快速检测。 基因芯片是近年来兴起的基因检测新技术。特别是最近迅速发展的长链寡核苷酸基因芯片技术（60-70 mer Oligo Microarray），为从基因水平高度特异性的检测SARS-CoV提供了可能。本研究还采用一种全基因组的标记方法，与基因芯片检测的大规模、高通量特性相配合，为基因芯片在临床诊断中的应用做出了贡献。 本研究首先确立了长链寡核苷酸基因芯片实验的基本条件，通过采用几种不同的基质材料进行点样杂交，以获得最适合长链寡核苷酸点样的片基材料以及最适的点样浓度和特异性。进而确定了用于寡核苷酸芯片杂交检测所需要的最佳探... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：99 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

种不同玻片固定率检测结果

玻片为固定率以及杂交后信噪比最高的片基材料。abCd图1一14种不同玻片固定率检测结果Fig.l一1Resultofirnrnobili乙时ionratioexPerimentof4differentslidesa.pely一L一lysineeoatedslideb.Co而ngCMT-GAPSslidee.U一Version01190slided.TelechemSuPerAmineslide图1一2四种不同玻片固定率检测荧光强度、信号强度、背景值Fig.1一2Floreseentdensity，signalandbaekgroundofirnrnobiliZationratioexPerimentof4differentslidese.poly一L一lysineeoatedslideb.Co而ngCMT-GAPSslidee.U一Version01190slided.TeleehemSuPe。勺rnineslide

度探针点样的pely一L一lysine处理玻片固定率检测结果浓度分ZlJ为0.25林g/林L，0.5林g/林L，l林g/卜L，1.5林g/林L，2林g/卜L，2.5林留匹的70mer寡核普酸探针点样后杂交后结果如图1一3所示，探针浓度与荧光强度的相关关系曲线如图1一所示。由图中可以看出用poly一L一lysine做片基，探针的固定率有随探针浓度增加而升高的趋势，探针浓度在1林岁林L以下时，固定率非常低，在1林岁林L~2.5林创林L之间时，固定率显著升高，并随探针浓度的递增呈逐步升高，在2.5抖留林L左右基本达到饱和。def图1一36种不同浓度探针点样固定率检测结果Fig.l一3Hybridizationresultsof而eroaJ汀aysPriniedby6differentProbeeoncentrationa.2.5林g/林Lb.2抖g/林L，e.1.5林g/林L，d.1林g/林L，e.0.5林g/林L

【参考文献】：
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本文编号：3307749