Shh通路介导损伤后反应性星形胶质细胞获得干细胞潜能

发布时间：2021-07-29 18:23

　　目的探讨Shh信号通路对大脑皮质反应性星形胶质细胞（RAS）获得神经干细胞潜能的影响。方法体外原代培养SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞,以肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1α和C1q三种因子诱导炎症型RAS,划痕实验制备创伤型RAS,使用免疫荧光染色法观察细胞形态及纯度。实验分为普通星形胶质细胞组（对照组）、炎症组、划痕组（创伤组）。炎症组培养至干预后24 h,对照组和划痕组培养至第5天进行免疫荧光染色观察巢蛋白（Nestin）阳性细胞,运用Western blot技术检测不同损伤模型的细胞中Shh蛋白的表达量。之后各组细胞培养至第7天更换神经干细胞培养基,将前述3组各自再分为激活组（各组细胞更换神经干细胞培养基后添加Shh激活剂SAG）和抑制组（各组细胞更换神经干细胞培养基后添加Shh抑制剂环巴胺）两个亚组,培养14 d后采用qRT-PCR检测各亚组RAS源性神经干细胞相关基因的表达量。结果细胞损伤模型中,免疫荧光染色证明各组细胞中划痕组Nestin阳性细胞明显多于炎症组和对照组。Western blot结果显示2组损伤细胞中划痕组Shh蛋白表达量高于炎症组（P<0... 

【文章来源】：天津医药. 2019,47(07)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1实验动物
    1.2主要试剂与仪器
    1.3方法
        1.3.1原代AST的提取和鉴定
        1.3.2免疫荧光技术检测AST纯度
        1.3.3实验分组
        1.3.4免疫荧光染色法检测Nestin表达量
        1.3.5Western blot检测Shh蛋白表达量
        1.3.6Shh信号通路的干预
        1.3.7荧光实时定量PCR (q RT-PCR）检测各组中神经干细胞相关基因表达水平
    1.4统计学方法
2 结果
    2.1 AST的培养及纯度鉴定
    2.2 各组细胞中Nestin蛋白的表达量
    2.3 不同损伤类型细胞中Shh蛋白表达量
    2.4 Shh激活剂对不同损伤类型诱导RAS源性神经干细胞基因表达的影响
    2.5 Shh抑制剂对不同损伤类型诱导RAS源性神经干细胞基因表达的影响
3 讨论
    3.1 RAS的特点
    3.2 Shh蛋白在不同损伤模型中的表达差异
    3.3 Shh信号通路的激活和抑制
    3.4 Shh信号通路诱导RAS获得干细胞潜能的优缺点


【参考文献】：
期刊论文
[1]星形胶质细胞转分化为神经元的研究进展[J]. 康文博,张赛,梁海乾.  天津医药. 2015(06)



本文编号：3309822