Ⅱ型单纯性疱疹病毒DNA疫苗的研究

发布时间：2017-04-28 01:08

  本文关键词：Ⅱ型单纯性疱疹病毒DNA疫苗的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：HSV-2是一种性传播病毒，目前为止，世界范围内超过5亿人感染。HSV-2是嗜神经病毒，具有感染多样性，终生潜伏于宿主感觉神经元和腰骶背根神经节，能引起生殖器疱疹和宫颈癌，并协助HIV-1病毒的传播。目前主要应用于临床治疗的阿昔洛韦等药物虽能减轻HSV-2感染，但不能阻止疾病复发，预防病毒的传播。因此，，研制安全、长期有效的HSV-2疫苗己成为预防病毒感染的关键。目前研究表明，体液免疫并不能彻底清除HSV-2，对于预防原发感染及限制复发感染，细胞免疫比体液免疫更为重要。HSV-2疫苗的未来发展也是以诱导产生细胞免疫应答为主，与体液免疫两者平衡。 DNA疫苗的出现带来了新的曙光，目前已经广泛用于人类病毒疫苗临床实验中，例如流感病毒、乙肝病毒和艾滋病病毒。动物实验显示接种HSV-2DNA疫苗可以诱导产生较为平衡的体液免疫和细胞免疫。本实验选择gD作为抗原，由于gD是HSV-2感染细胞的关键的糖蛋白之一，在病毒穿膜的环节中发挥重要的作用，其本身具有较丰富的抗体表位和T细胞表位，可以诱导产生相对较高的中和抗体和T细胞免疫应答，是HSV-2疫苗研究的首选。同时，为能够加强细胞免疫，本实验选择了另一种抗原UL25，研究表明UL25表位肽可以增殖活化HSV-2CD8+T细胞。将UL25与gD2基因融合，作为DNA疫苗，可诱导产生更强的细胞免疫和体液免疫。 由于DNA疫苗免疫原性较弱，所以本实验选用IL-28B作为HSV-2DNA疫苗的佐剂，以期能有效的解决这一难题，从而抑制和清除HSV-2病毒感染。IL-28B属于IFN-λs家族，同其它成员一样，能阻止或限制病毒感染。Morrow等人使用IL-28作为HIV和流感H1N1DNA疫苗的佐剂，研究表明IL-28B在小动物模型能增强获得性细胞免疫应答，促进记忆细胞的增殖，增强CTL杀伤作用。 综上所述，为了获得更强的细胞免疫应答与体液免疫，制备安全有效的HSV-2疫苗，本论文分别构建了gD2和gD2UL25两种DNA疫苗，以IL-28B作为佐剂，共免疫Balb/c小鼠，与FI-HSV-2和rAd-gD疫苗形式比较，研究DNA疫苗的免疫原性和清除HSV-2病毒的能力，评价其在致死剂量病毒攻击Balb/c小鼠模型中的保护效果；同时，评价IL-28B能否作为HSV-2DNA疫苗的佐剂，增强免疫应答，预防和抵抗HSV-2病毒的感染。实验结果表明DNA疫苗能诱导产生HSV-2特异的体液免疫和细胞免疫，降低生殖道病毒载量，微弱的减轻攻毒小鼠发病程度，但免疫反应较弱，保护能力有限，虽能抑制并清除HSV-2病毒，但是效果不佳。与IL-28B共免疫后，能够明显增强特异性IgG及IgG2a抗体的产生，增强与Th1相关联的抗原特异性免疫应答，较低水平地促进中和抗体的产生，显著性的增强IFN-γ的分泌，增强细胞免疫应答，较为明显的提高DNA疫苗清除生殖道HSV-2病毒的能力，显著减轻小鼠的发病情况，缩短病程，使小鼠痊愈，表明IL-28B可以作为HSV-2DNA疫苗佐剂，增强其抵抗HSV-2病毒能力。同时，融合的多基因质粒gD2UL25比gD2产生更强的体液免疫和细胞免疫，显著的提高小鼠抵御致死剂量HSV-2病毒的能力。
【关键词】：Ⅱ型单纯性疱疹病毒 DNA疫苗 糖蛋白D UL25 白介素28B
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 前言11-32
• 1.1 Ⅱ型单纯性疱疹病毒11-12
• 1.2 HSV-2 病毒结构与功能12-14
• 1.3 HSV-2 的侵染过程14-15
• 1.4 HSV-2 发病机理与潜伏复发机制15-16
• 1.5 HSV-2 免疫作用机制16-18
• 1.5.1 HSV-2 与先天性免疫16-17
• 1.5.2 HSV-2 与获得性免疫17-18
• 1.6 HSV-2 疫苗的研究现状及其应用前景18-22
• 1.6.1 灭活全病毒疫苗18-19
• 1.6.2 减毒活疫苗19
• 1.6.3 复制缺损型疫苗19-20
• 1.6.4 亚单位疫苗20-21
• 1.6.5 病毒载体疫苗21-22
• 1.7 HSV-2 DNA 疫苗的应用22-26
• 1.7.1 DNA 疫苗的起源及作用机理22-24
• 1.7.2 HSV-2 DNA 疫苗的研究现状及展望24-26
• 1.8 Ⅲ型干扰素26-29
• 1.8.1 干扰素简介26
• 1.8.2 Ⅲ型干扰素简介26-27
• 1.8.3 Ⅲ型干扰素的临床应用27-28
• 1.8.4 IL-28B 佐剂研究现状及前景28-29
• 1.9 论文的立题依据及设计29-32
• 1.9.1 立题依据与创新点29-30
• 1.9.2 实验思路与设计30-32
• 第二章 实验材料与方法32-46
• 2.1 实验材料32-36
• 2.1.1 菌株、细胞、质粒、病毒和动物32
• 2.1.2 引物和短肽32-33
• 2.1.3 主要试剂及缓冲液33-34
• 2.1.4 试剂配制34-36
• 2.2 实验仪器36-37
• 2.3 实验方法37-46
• 2.3.1 gD2UL25 基因序列的合成37
• 2.3.2 gD2 及 gD2UL25 重组质粒的构建及鉴定37-38
• 2.3.3 gD2 及 gD2UL25 真核蛋白表达的鉴定38-39
• 2.3.4 IL-28B 基因序列的合成39
• 2.3.5 IL-28B 质粒的构建39
• 2.3.6 IL-28B-HA 真核蛋白表达的鉴定及定量39-41
• 2.3.7 重组质粒 gD2、gD2UL25 及 IL-28B 的扩增41
• 2.3.8 免疫41-42
• 2.3.9 免疫原性评价42-44
• 2.3.10 攻毒后保护力评价44-46
• 第三章 实验结果与讨论46-61
• 3.1 gD2 及 gD2UL25 重组质粒的构建46
• 3.2 gD2 及 gD2UL25 真核蛋白表达的鉴定46-47
• 3.3 IL-28B 质粒的构建47-48
• 3.4 IL-28B-HA 真核蛋白表达的鉴定及 ELISA 定量48-49
• 3.4.1 IL-28B-HA 真核蛋白表达的鉴定48
• 3.4.2 IL-28B-HA 真核蛋白表达 ELISA 定量48-49
• 3.5 免疫效果评价49-58
• 3.5.1 免疫原性评价49-55
• 3.5.2 攻毒后保护力评价55-58
• 3.6 分析与讨论58-61
• 全文结论61-62
• 参考文献62-71
• 作者简介71-72
• 致谢72

【共引文献】

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  本文关键词：Ⅱ型单纯性疱疹病毒DNA疫苗的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：331826