鼠疫耶尔森氏菌基因表达谱技术平台的建立与应用

发布时间：2021-08-09 11:50

　　目的：建立细菌表达谱分析技术平台；初步将此技术应用于鼠疫耶尔森氏菌基因表达谱的研究，为鼠疫耶尔森氏菌功能基因组研究奠定基础：（1） 磁捕获杂交法提取和纯化细菌mRNA方法的建立；（2） 基于DNA芯片的基因表达谱分析技术平台的建立与评价；（3） 温度调节鼠疫耶尔森氏菌基因表达谱分析的研究；（4） 实时定量RT-PCR对表达谱技术的评价。方法：利用磁珠捕获杂交法从总RNA中除去rRNA，再用乙醇沉淀纯化得到mRNA；从对各实验条件的探索行细菌DNA芯片表达谱技术平台的搭建与优化，用实时定量：RT-PCR对此技术平台进行评价；通过改变培养温度模拟鼠疫耶尔森氏菌感染哺乳动物宿主时微环境的变化，研究其可能的致病相关基因。选取15条基因用实时定量RT-PCR对表达谱分析结果进行评价。结果：（1） 建立了磁珠捕获杂交法提取和纯化细菌mRNA的方法；（2） 搭建了基于DNA芯片的细菌表达谱技术平台；（3） 发现401个不同温度条件下差异表达的基因，鼠疫耶尔森氏菌的许多重要基因的表达发生了变化，如编码毒力决定因子、调节元件、铁代谢和能量代谢相关蛋白和前噬菌体的基因。另外，还发现了许多未知功能的基因簇。... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：135 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

鼠疫菌在自然界中的循环，以及鼠间鼠疫和人间鼠疫的形成〔‘“]

yersinia尸estisEV76总洲A电泳图

号中可能还有部分rRNA没有去除。A260nm/A280nm均在1.8一2.1之间，说明RNA纯度较高。分别将1林g总RNA和实验组的1林g富集后的RNA同时电泳，结果见图4。从电泳结果看，1号和2号去除165rRNA和235rRNA较彻底，而3号和4号富集后的RNA仍见165rRNA和235rRNA条带。这说明磁珠去除rRNA的能力已达到饱和，不能将所有的16SrRNA和235rRNA去除。在富集的样品中，一些mRNA和小分子RNAs可见。所以，综合mRNA定量和电泳结果，0.5mg磁珠加入1印g总RNA富集mRNA最佳。表6等量磁珠(0.5mg)加不同量的总RNA富集mRNA的结果实验组别总RNA量扭g)富集mRNA量(林g)富集比率(%)戊60n韶A28onmQ了O声51O150.89351.91443.440617.8919.147.098929.9335.491.92.02.4mRNA完整性鉴定结果富集mRNA的完整性通过变性胶电泳(图4)和RT-PCR(图5)进行验证。结果表明，富集mRNA是完整的。图5中NoRl’-Control阴性对照没有条带

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3332013