空肠弯曲菌粘附蛋白基因工程疫苗的实验研究

发布时间：2021-08-10 17:22

　　第一部分 peb1A基因表达载体的构建及相应蛋白的表达目的 ：以基因工程技术构建编码空肠弯曲菌（CJ）粘附蛋白（periplasmic solute-binding protein，PEB1）编码基因peb1A的原核重组表达质粒，并获取目的蛋白，为进一步研究其生物学特性和制备CJ亚单位疫苗奠定基础。方法：（1）表达质粒的构建及鉴定：以含有BamHⅠ和Hind Ⅲ酶切位点的同一对引物行PCR反应以获取七个血清株空肠弯曲菌的peb1A基因片段，测序比较其同源性。小量提取质粒pET32a（+）和pQE30，选择与GBS最为相关的Pen19 CJ 标准株PCR产物为目的片段，同时对目的片段和pET32a（+）、pQE30行双酶切反应；酶切产物纯化后连接，转染入大肠杆菌JM109，兰白斑和氨苄青霉素抗性平板筛选阳性菌落，重组质粒经双酶切和PCR反应鉴定后测序，分别命名为pET32a（+）-peb1A和pQE30-peb1A;（2）原核表达重组质粒在大肠杆菌中的表达及纯化:将重组质粒pET32a（+）-peb1A转化入大肠杆菌BL21（DE3），pQE30-peb1A转化入SG13009（p... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：133 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

pET32a(+)-peb1A重组质粒的构建Fig1-1ThereconstructionofpET32a(+)-peb1Aplasmid

【参考文献】：
期刊论文
[1]空肠弯曲菌脂多糖在空肠弯曲菌诱发周围神经病中的致病作用[J]. 高玉兴,蔡方成.  实用儿科临床杂志. 2002(05)
[2]不同血清型空肠弯曲菌免疫大鼠的血清及单个核细胞转移诱发周围神经病变的比较研究[J]. 张杰敏,蔡方成.  中华儿科杂志. 2002(01)
[3]空肠弯曲菌诱发周围神经病的免疫学证据[J]. 张杰敏,蔡方成.  中华儿科杂志. 2001(02)
[4]不同菌型空肠弯曲菌免疫诱发大鼠变态反应性周围神经病的对比研究[J]. 张杰敏,蔡方成.  中华儿科杂志. 2001(01)
[5]空肠弯曲菌感染致人畜共患的周围神经病[J]. 刘超,蔡方成,席孝庄,丁波,翟奇,张晓萍,银平.  中华儿科杂志. 2000(01)
[6]空肠弯曲菌诱发实验性周围神经病的免疫学机理的研究[J]. 朱春霓,蔡方成,张晓萍.  中华儿科杂志. 1999(09)
[7]不同类型格林巴利综合征患者单个核细胞免疫学致病特征的实验研究[J]. 吴梅,蔡方成.  中华儿科杂志. 1998(08)
[8]空肠弯曲菌共同抗原的实验研究及初步应用[J]. 张京海,杜桂香,张乐海,张桂珍,王宜军,孙守宝,谢学军.  临床检验杂志. 1997(02)



本文编号：3334475