人N端脂多糖结合蛋白（tLBP）基因的克隆表达及保护作用的研究

发布时间：2021-08-14 19:36

　　经适当修饰改造的N-末端截断型脂多糖结合蛋白（truncated LBP,tLBP）是一种基因片段长约0.7kb，分子量27kDa，含有亲代分子197个氨基酸的多肽，在分泌至内质网时切割下N-末端25个氨基酸的信号肽。该分子保留了与LPS作用的结合域, 可能更有效地结合LPS，但不能转移LPS到CD14，从而可阻止LPS-CD14的形成，进而抑制单核/巨噬细胞过度分泌炎性细胞因子。发挥着与亲代分子LBP竞争结合LPS或中和LPS的作用，但有关tLBP的确切生物学活性以及与LPS的中和作用仍不十分清楚。本课题在已获得人LBP全长cDNA的基础上，设计了扩增tLBP基因的引物，成功克隆到目的基因片段，并顺利插入杆状病毒转移载体pFASTBAC以及完成了目的基因的特异转座和病毒重组，成功构建了杆状病毒表达系统。应用Sf21昆虫细胞和BAC-TO-BAC杆状病毒表达系统、TALON金属鏊合层析等方法表达纯化了重组的人N末端脂多糖结合蛋白cDNA的表达产物，通过Lowry, SDS-PAGE, Western blot及毛细管电泳等方法对表达产物进行生化特性鉴定，经体外与LPS结合及细胞评价活性... 

【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市

【文章页数】：82 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

一应用BAC-TO-BAC表达系统构建重组病毒流程

图I一扩增片段的纯化

图 1-10 重组 BacmidtLBP 的 á-互补筛图中箭头所示白色菌落为重组菌落Fig.1-10 á-supplementary screening of recombinan(white colony with arrow indicating recombinanBacmidtLBP DNA的凝胶电泳 DNA 分子量大于 135kb 要使用低电压和低浓度1 2

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3343059