脂肪干细胞-丝素/壳聚糖支架复合物在外泌体诱导下的体外成骨效应
发布时间：2021-08-16 14:47
目的探究成骨分化脂肪干细胞（ADSCs）来源的外泌体对ADSCs-丝素/壳聚糖三维支架复合物（ADSCs-SF/CS）的成骨效应。方法体外提取、培养和鉴定ADSCs,采用冷冻干燥法制备三维支架。将ADSCs诱导为成骨细胞,超速离心提取外泌体。将ADSCs接种于支架上,扫描电镜观察。将细胞支架复合体分为普通培养液组（阴性对照组）、成骨诱导液组（阳性对照组）、普通培养液加外泌体组（实验组a）、成骨诱导液加外泌体组（实验组b）,连续培养14 d后,采用Western blotting检测成骨相关蛋白Runx2的表达量以证实ADSCs成骨分化,并通过CCK-8法及碱性磷酸酶（ALP）活性检测探究外泌体对ADSCs-SF/CS复合物中ADSCs体外增殖及成骨分化效应的作用。结果 CCK-8结果显示,实验组a与阴性对照组相比,加入外泌体有利于ADSCs的增殖,Runx2及ALP活性结果显示,实验组b与阳性对照组相比,加入外泌体可使ADSCs-SF/CS复合物中的ADSCs成骨效应显著增强。结论成骨诱导后,ADSCs来源的外泌体可诱导附着于SF/CS上的ADSCs向成骨细胞分化,并且对ADSCs的成...
【文章来源】：中国医科大学学报. 2019,48(10)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
倒置显微镜下可见原代培养5d后ADSCs增长活跃×100Fig.1Imageunderaninvertedmicroscope：adipocytegrowth
悬浮于培养液中，24h可全部贴壁，初期细胞体积较小，呈纺锤形或梭形；72h细胞体积逐渐增大，呈梭形；120h梭形细胞大量增殖，局部呈平行或漩涡状紧密排列（图1）。分别用油红O、茜素红及甲苯胺蓝染色，镜下所见证实ADSCs具有向成熟的脂肪细胞、骨细胞及软骨细胞多向分化的潜能（图2）。A，ADSCswereinducedtodifferentiateintoadipocytes（oilredOstaining）；B，ADSCswereinducedtodifferentiateintoosteoblasts（alizarinredstain-ing）；C，ADSCswereinducedtodifferentiateintochondrocytes（toluidinebluestaining）.图2ADSCs向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞诱导分化21d×100Fig.2ADSCswereinducedtodifferentiateintoadipocytes，osteoblasts，andchondrocytesafterbeingfosteredfor21d×100图1倒置显微镜下可见原代培养5d后ADSCs增长活跃×100Fig.1Imageunderaninvertedmicroscope：adipocytegrowthwasactiveafterprimaryculturingfor5days×1002.2外泌体的形态及鉴定透射电镜下可见外泌体直径介于40~100nm之间，为具有明显双层膜结构的圆形杯盘状囊泡（图3）。应用BCA蛋白浓度试剂盒测得平均每180mL上清可提取外泌体蛋白浓度约为1.340μg/μL。West-ernblotting法以β-actin内参为标准，可见成骨诱导21d的ADSCs及提取的外泌体中均有CD9和CD63标记蛋白表达，进一步证实提取的外泌体来源于成骨分化的ADSCs（图4）。2.3ADSCs-SF/CS复合物在外泌体诱导下的成骨效应2.3.1扫描电镜下观察细胞在支架内附着情况：电镜下可见SF/CS材料呈多孔网状结构，孔隙的走向没有方向性。孔径大小从数十到300μm不等，孔与孔之间相连通，孔隙内壁平滑平整（图5），培养1周时支架表面及孔隙中可见ADSCs黏附，细胞与支架材料紧密黏接，伪足向各个?
/μL。West-ernblotting法以β-actin内参为标准，可见成骨诱导21d的ADSCs及提取的外泌体中均有CD9和CD63标记蛋白表达，进一步证实提取的外泌体来源于成骨分化的ADSCs（图4）。2.3ADSCs-SF/CS复合物在外泌体诱导下的成骨效应2.3.1扫描电镜下观察细胞在支架内附着情况：电镜下可见SF/CS材料呈多孔网状结构，孔隙的走向没有方向性。孔径大小从数十到300μm不等，孔与孔之间相连通，孔隙内壁平滑平整（图5），培养1周时支架表面及孔隙中可见ADSCs黏附，细胞与支架材料紧密黏接，伪足向各个方向伸展，细胞周围可见细图3外泌体透射电镜图×80000Fig.3Exosomesobservedunderatransmissionelectronmi-croscope×80000ABC第10期魏松乔等.脂肪干细胞-丝素/壳聚糖支架复合物在外泌体诱导下的体外成骨效应
本文编号：3345873
【文章来源】：中国医科大学学报. 2019,48(10)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
倒置显微镜下可见原代培养5d后ADSCs增长活跃×100Fig.1Imageunderaninvertedmicroscope：adipocytegrowth
悬浮于培养液中，24h可全部贴壁，初期细胞体积较小，呈纺锤形或梭形；72h细胞体积逐渐增大，呈梭形；120h梭形细胞大量增殖，局部呈平行或漩涡状紧密排列（图1）。分别用油红O、茜素红及甲苯胺蓝染色，镜下所见证实ADSCs具有向成熟的脂肪细胞、骨细胞及软骨细胞多向分化的潜能（图2）。A，ADSCswereinducedtodifferentiateintoadipocytes（oilredOstaining）；B，ADSCswereinducedtodifferentiateintoosteoblasts（alizarinredstain-ing）；C，ADSCswereinducedtodifferentiateintochondrocytes（toluidinebluestaining）.图2ADSCs向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞诱导分化21d×100Fig.2ADSCswereinducedtodifferentiateintoadipocytes，osteoblasts，andchondrocytesafterbeingfosteredfor21d×100图1倒置显微镜下可见原代培养5d后ADSCs增长活跃×100Fig.1Imageunderaninvertedmicroscope：adipocytegrowthwasactiveafterprimaryculturingfor5days×1002.2外泌体的形态及鉴定透射电镜下可见外泌体直径介于40~100nm之间，为具有明显双层膜结构的圆形杯盘状囊泡（图3）。应用BCA蛋白浓度试剂盒测得平均每180mL上清可提取外泌体蛋白浓度约为1.340μg/μL。West-ernblotting法以β-actin内参为标准，可见成骨诱导21d的ADSCs及提取的外泌体中均有CD9和CD63标记蛋白表达，进一步证实提取的外泌体来源于成骨分化的ADSCs（图4）。2.3ADSCs-SF/CS复合物在外泌体诱导下的成骨效应2.3.1扫描电镜下观察细胞在支架内附着情况：电镜下可见SF/CS材料呈多孔网状结构，孔隙的走向没有方向性。孔径大小从数十到300μm不等，孔与孔之间相连通，孔隙内壁平滑平整（图5），培养1周时支架表面及孔隙中可见ADSCs黏附，细胞与支架材料紧密黏接，伪足向各个?
/μL。West-ernblotting法以β-actin内参为标准，可见成骨诱导21d的ADSCs及提取的外泌体中均有CD9和CD63标记蛋白表达，进一步证实提取的外泌体来源于成骨分化的ADSCs（图4）。2.3ADSCs-SF/CS复合物在外泌体诱导下的成骨效应2.3.1扫描电镜下观察细胞在支架内附着情况：电镜下可见SF/CS材料呈多孔网状结构，孔隙的走向没有方向性。孔径大小从数十到300μm不等，孔与孔之间相连通，孔隙内壁平滑平整（图5），培养1周时支架表面及孔隙中可见ADSCs黏附，细胞与支架材料紧密黏接，伪足向各个方向伸展，细胞周围可见细图3外泌体透射电镜图×80000Fig.3Exosomesobservedunderatransmissionelectronmi-croscope×80000ABC第10期魏松乔等.脂肪干细胞-丝素/壳聚糖支架复合物在外泌体诱导下的体外成骨效应
本文编号：3345873
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