H5N1型流感病毒HA蛋白的B细胞表位研究及抗原变异分析
发布时间：2021-08-21 11:02
1997年H5N1型禽流感病毒首次跨越种属障碍在香港造成了18例人的感染,其中6例死亡。新基因型的H5N1流感病毒仍然在亚洲尤其是东亚多国传播,人感染的病例也在不断出现。人群对H5N1型流感病毒保护性免疫力的普遍缺乏有可能引起新一轮的流感大爆发。流感病毒的流行为研究病毒-宿主的进化提供了条件。流感病毒蛋白的不断变异使病毒能逃避宿主的免疫识别。抗原漂移是流感病毒变异的主要手段,也是病毒进化的主要机制。流感病毒表面糖蛋白血凝素HA分子是病毒基因组中变异率最高的分子,是中和性抗体的主要靶标,其与宿主细胞表面受体唾液酸残基末端的结合是决定宿主特异性的主要因素。HA蛋白由HA1和HA2两个亚单位组成,其中,HA1的变异频率高于HA2。HA1亚单位处于正达尔文选择产生新的变异株。对H3亚型HA分子的研究表明,处于HA蛋白表位区域的氨基酸相对于非表位区域氨基酸而言,其密码子使用更具有多样性。有研究证实了H3亚型HA分子存在免疫优势性位点,一个或两个免疫优势性位点的替换就能引起抗原性的改变。血凝素HA蛋白抗原性表位作图是研究其抗原性变异的第一步。我们的研究表明,制备的15株H5 HA蛋白特异的单抗的表...
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：70 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
酵母细胞表面呈现融合蛋白
图 1-2 H5 亚型 HA 分子的 8 个嵌套截短片段以及 5 个截断片段结构示意图A: H5 亚型 HA 分子的 8 个嵌套截短片段B: H5 亚型 HA 分子的 5 个截断片段黑色线条代表的是全长 H5 亚型 HA 分子(amino acids 1-302)，灰色线条代表的是嵌套截短片段以及截断片段。括号中的数字代表的是 HA 分子片段的起始和终止位置(不包括 A/Hong Kong/482/97病毒株 HA 序列中的前 16 个氨基酸)。FIG. 1-2 Schematic illustration of the nested-deletion H5 HA fragmentsThe 8 nested-deletion fragments of H5 HA protein that we designed (A) and the additional 5 fragmentsof H5 HA protein within the region of amino acids 1-302 (B) are listed. The black bar represents thefull-length H5 HA, the gray bars represent the nested-deletion H5 HA fragments, and the start and stopamino acid positions on the H5 HA protein (the first 16 amino acids of the H5 HA protein from A/HongKong/482/97were not included) are indicated in parentheses.
是通过将每个蛋白的平均荧光强度除以EBY100/pYD1酵母细胞的荧光强度：比值≥2时就认为是阳性。我们将所有流式检测结果转化为RAYS比值，作为纵坐标来评估抗原变性前后与抗体的特异性结合，试验结果总结于图1-3。热变性后单抗H5M2、H5M5、H5M11、H5M12、H5M24和H5M25与全长H5 HA蛋白及其片段HA5-8F的反应性丢失，说明上述单抗识别的是位于H5 HA蛋白1-302氨基酸区域的连续性或非连续性构象性表位。片段HA5-8F与单抗H5M28的抗原抗体反应、片段HA5-6F与单抗H5M26的抗原抗体反应也在热变性后丢失，说明单抗H5M28和 H5M26识别的是位于H5 HA1-302区域的构象性表位。热变性同样使单抗H5M9 和H5M29与片段HA5-7F的反应性消失，说明其识别的也是位于H5 HA1-302区域的构象性表位。单抗H5M6、H5M7、H5M8和H5M10与H5 HA片段HA13L的抗原抗体反应在热变性后丢失，说明它们识别的是位于H5 HA蛋白69-302氨基酸区域的构象性表位。单抗H5M20在热变性后仍能与酵母表面呈现的H5 HA全长蛋白及其片段HA2-8F反应。尤其是片段HA5F 和 HA8F在热变性后与单抗H5M20反应的RAYS比值比热变性前还高，说明单抗H5M20针对的是位于H5 HA蛋白69-133区域的线性表位。第05期 李健：H5N1型流感病毒HA蛋白的B细胞表位研究及抗原变异分析 E059-30-21
本文编号：3355477
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：70 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
酵母细胞表面呈现融合蛋白
图 1-2 H5 亚型 HA 分子的 8 个嵌套截短片段以及 5 个截断片段结构示意图A: H5 亚型 HA 分子的 8 个嵌套截短片段B: H5 亚型 HA 分子的 5 个截断片段黑色线条代表的是全长 H5 亚型 HA 分子(amino acids 1-302)，灰色线条代表的是嵌套截短片段以及截断片段。括号中的数字代表的是 HA 分子片段的起始和终止位置(不包括 A/Hong Kong/482/97病毒株 HA 序列中的前 16 个氨基酸)。FIG. 1-2 Schematic illustration of the nested-deletion H5 HA fragmentsThe 8 nested-deletion fragments of H5 HA protein that we designed (A) and the additional 5 fragmentsof H5 HA protein within the region of amino acids 1-302 (B) are listed. The black bar represents thefull-length H5 HA, the gray bars represent the nested-deletion H5 HA fragments, and the start and stopamino acid positions on the H5 HA protein (the first 16 amino acids of the H5 HA protein from A/HongKong/482/97were not included) are indicated in parentheses.
是通过将每个蛋白的平均荧光强度除以EBY100/pYD1酵母细胞的荧光强度：比值≥2时就认为是阳性。我们将所有流式检测结果转化为RAYS比值，作为纵坐标来评估抗原变性前后与抗体的特异性结合，试验结果总结于图1-3。热变性后单抗H5M2、H5M5、H5M11、H5M12、H5M24和H5M25与全长H5 HA蛋白及其片段HA5-8F的反应性丢失，说明上述单抗识别的是位于H5 HA蛋白1-302氨基酸区域的连续性或非连续性构象性表位。片段HA5-8F与单抗H5M28的抗原抗体反应、片段HA5-6F与单抗H5M26的抗原抗体反应也在热变性后丢失，说明单抗H5M28和 H5M26识别的是位于H5 HA1-302区域的构象性表位。热变性同样使单抗H5M9 和H5M29与片段HA5-7F的反应性消失，说明其识别的也是位于H5 HA1-302区域的构象性表位。单抗H5M6、H5M7、H5M8和H5M10与H5 HA片段HA13L的抗原抗体反应在热变性后丢失，说明它们识别的是位于H5 HA蛋白69-302氨基酸区域的构象性表位。单抗H5M20在热变性后仍能与酵母表面呈现的H5 HA全长蛋白及其片段HA2-8F反应。尤其是片段HA5F 和 HA8F在热变性后与单抗H5M20反应的RAYS比值比热变性前还高，说明单抗H5M20针对的是位于H5 HA蛋白69-133区域的线性表位。第05期 李健：H5N1型流感病毒HA蛋白的B细胞表位研究及抗原变异分析 E059-30-21
本文编号：3355477
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