利用BALB/C小鼠及其原代培养心肌细胞研究川金丝猴源CVB3的致病性
发布时间：2021-08-23 16:03
柯萨奇病毒（Coxsackievirus,CV）属于小RNA病毒科,肠道病毒属的成员,自1948年发现以来,在人群中的感染普遍存在,是近年来引起关注的人类病毒性心肌炎的一种主要病原之一,而且在国内外人群中的发病呈上升趋势。CV可分为A、B两个型,即CVA和CVB,其中,CVB又有6个血清型（CVB1CVB6）。除人类外,CVB还可感染猩猩和比格犬等动物,并导致死亡。2005年,本课题组对临床死亡的金丝猴进行系统的诊断,证实其死于CVB3感染,这是国内外首次有该病原感染金丝猴死亡的报道。多数资料报道CVB3具有嗜心肌性,主要侵犯心肌并造成其损伤,但是,有的毒株还可导致胰腺、肾脏、神经以及子宫等组织器官损伤,也有部分毒株甚至没有致病性。由此可见,不同的分离毒株感染后其致病性不尽相同。为了明确川金丝猴源CVB3（CVB3/SGM-05）这一新分离毒株的致病特性,本研究以BALB/C小鼠为实验动物,开展相关的致病性研究。本研究以新生BALB/C小鼠的心脏为材料,分离培养其心肌细胞,经形态学观察及其心肌生长特性鉴定,确定已成功建立了一种原代心肌细胞培养方法。为研究具有嗜心肌...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
倒置相差显微镜观察原代心肌细胞培养3天后(×40)
37图1.1 倒置相差显微镜观察原代心肌细胞培养2天后 (×10)Fig 1.1 The myocardial cells of mice has been primarily culture for 2 days. ×10图1.2 倒置相差显微镜观察原代心肌细胞培养3天后 (×40)Fig.1.2 The myocardial cells of mouse has been primarily culture for 3 days. ×401.2.2 CVB3/SGM-05 毒株的毒力测定CVB3/SGM-05 接种 Vero 细胞测定的 TCID50为 0.1ml 10-7.1稀释的病毒液。1.2.3 CVB3/SGM-05 感染 BALB/C 小鼠原代心肌细胞的观察BALB/C 小鼠原代心肌细胞在接种 CVB3/SGM-05 毒株后 15h 左右即可见到部分细胞圆缩、脱落，有的心肌细胞的节律性搏动减弱或停止；约 20h 后，变形细胞增多；32h左右 80%以上的细胞出现 CPE（图 1.3），细胞搏动停止，培养液中悬浮大量的脱落坏死细胞。
38图1.3 接种CVB3/SGM-05的BALB/C小鼠原代心肌细胞出现明显的细胞病变Fig. 1.3 The CPE of CVB3/SGM-05 in myocardial cells from BALB/C mice (×40)对照孔未接种病毒的心肌细胞保持贴壁生长，细胞形态完整，未发现有明显变化（图1.4）。图1.4 对照BALB/C小鼠原代心肌细胞生长正常Fig. 1.4 The control of myocardial cells of mice (×40)收集 32h 后的病变细胞培养液，离心处理后电镜负染观察可见大量的直径约 25nm左右的小 RNA 病毒样病毒粒子（图 1.5，箭头所示为病毒粒子）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]病毒性心肌炎的发病机制[J]. 宁娟,李永宏. 医学综述. 2008(09)
[2]临床死亡川金丝猴心肌炎病例的诊断及病因分析[J]. 贺文琦,陆慧君,宋德光,成军,盖显英,陈启军,高丰. 兽类学报. 2008(01)
[3]小儿柯萨奇病毒性脑炎117例临床分析[J]. 谢同炳,周月朋. 现代医学. 2007(04)
[4]柯萨奇病毒感染98例临床分析[J]. 张素兰. 浙江医学. 2007(06)
[5]柯萨奇病毒感染与自然流产128例分析[J]. 刘莹,薛晓玲,刘郁明,成艳,索亮亮. 中国妇幼保健. 2007(02)
[6]柯萨奇病毒B感染和细胞内信号传导调控[J]. 仇慧仙,姜剑斌,陈其. 国际病毒学杂志. 2006(05)
[7]疑似病毒感染金丝猴死亡病例报告[J]. 高丰,贺文琦,陆慧君,宋德光,成军,常灵竹,赵魁. 中国兽医学报. 2006(05)
[8]柯萨奇病毒感染与过敏性紫癜的关系[J]. 刘新颜,王晓刚,沈娟,李政锦,董彬,周晓玲. 实用儿科临床杂志. 2006(10)
[9]细胞凋亡与心肌炎发病机制的关系及抗细胞凋亡的研究进展[J]. 郭春艳,韩波. 中国实用儿科杂志. 2006(04)
[10]2001年徐州地区暴发性病毒性脑膜炎病原的研究[J]. 李显,郭喜玲,史智扬,倪大新,汪华. 中华实验和临床病毒学杂志. 2006(01)
本文编号：3358175
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
倒置相差显微镜观察原代心肌细胞培养3天后(×40)
37图1.1 倒置相差显微镜观察原代心肌细胞培养2天后 (×10)Fig 1.1 The myocardial cells of mice has been primarily culture for 2 days. ×10图1.2 倒置相差显微镜观察原代心肌细胞培养3天后 (×40)Fig.1.2 The myocardial cells of mouse has been primarily culture for 3 days. ×401.2.2 CVB3/SGM-05 毒株的毒力测定CVB3/SGM-05 接种 Vero 细胞测定的 TCID50为 0.1ml 10-7.1稀释的病毒液。1.2.3 CVB3/SGM-05 感染 BALB/C 小鼠原代心肌细胞的观察BALB/C 小鼠原代心肌细胞在接种 CVB3/SGM-05 毒株后 15h 左右即可见到部分细胞圆缩、脱落，有的心肌细胞的节律性搏动减弱或停止；约 20h 后，变形细胞增多；32h左右 80%以上的细胞出现 CPE（图 1.3），细胞搏动停止，培养液中悬浮大量的脱落坏死细胞。
38图1.3 接种CVB3/SGM-05的BALB/C小鼠原代心肌细胞出现明显的细胞病变Fig. 1.3 The CPE of CVB3/SGM-05 in myocardial cells from BALB/C mice (×40)对照孔未接种病毒的心肌细胞保持贴壁生长，细胞形态完整，未发现有明显变化（图1.4）。图1.4 对照BALB/C小鼠原代心肌细胞生长正常Fig. 1.4 The control of myocardial cells of mice (×40)收集 32h 后的病变细胞培养液，离心处理后电镜负染观察可见大量的直径约 25nm左右的小 RNA 病毒样病毒粒子（图 1.5，箭头所示为病毒粒子）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]病毒性心肌炎的发病机制[J]. 宁娟,李永宏. 医学综述. 2008(09)
[2]临床死亡川金丝猴心肌炎病例的诊断及病因分析[J]. 贺文琦,陆慧君,宋德光,成军,盖显英,陈启军,高丰. 兽类学报. 2008(01)
[3]小儿柯萨奇病毒性脑炎117例临床分析[J]. 谢同炳,周月朋. 现代医学. 2007(04)
[4]柯萨奇病毒感染98例临床分析[J]. 张素兰. 浙江医学. 2007(06)
[5]柯萨奇病毒感染与自然流产128例分析[J]. 刘莹,薛晓玲,刘郁明,成艳,索亮亮. 中国妇幼保健. 2007(02)
[6]柯萨奇病毒B感染和细胞内信号传导调控[J]. 仇慧仙,姜剑斌,陈其. 国际病毒学杂志. 2006(05)
[7]疑似病毒感染金丝猴死亡病例报告[J]. 高丰,贺文琦,陆慧君,宋德光,成军,常灵竹,赵魁. 中国兽医学报. 2006(05)
[8]柯萨奇病毒感染与过敏性紫癜的关系[J]. 刘新颜,王晓刚,沈娟,李政锦,董彬,周晓玲. 实用儿科临床杂志. 2006(10)
[9]细胞凋亡与心肌炎发病机制的关系及抗细胞凋亡的研究进展[J]. 郭春艳,韩波. 中国实用儿科杂志. 2006(04)
[10]2001年徐州地区暴发性病毒性脑膜炎病原的研究[J]. 李显,郭喜玲,史智扬,倪大新,汪华. 中华实验和临床病毒学杂志. 2006(01)
本文编号：3358175
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