neuB1基因失活空肠弯曲菌突变株的构建及其临床意义
发布时间：2021-09-17 21:43
目的构建唾液酸合成酶基因1（neuB1）失活、脂多糖（LPS）中唾液酸（SA）缺失的空肠弯曲菌（Campylobacterjejuni,Cj）O∶19突变株,以确认CjLPS中,含SA基团的终端GM1样结构在Cj相关格林-巴利综合征（GBS）发病机理中的关键作用。方法从已有neuB1基因失活的Cj肠炎相关菌株O∶2DNA中,将含卡那霉素抗性基因（KmRcassette）的neuB1突变片段———neuB1::KmR克隆到pGEM-T载体,形成突变载体pGEM-neuB1::KmR,进一步转化到与GBS相关的CjO∶19野生株,获得CjO∶19突变株,行PCR和RT-PCR鉴定。SDS-PAGE分析CjLPS,过碘酸-间苯二酚和酸性茚三酮反应法分别检测CjLPS中SA。霍乱毒素B亚单位（CTB）结合反应检测Cj菌体裂解物及LPS中神经节苷脂GM1模拟结构。最后以突变株及其同源野生株LPS为抗原分别免疫豚鼠,第5周取坐骨神经原纤维分离。结果neuB1基因突变片段———neuB1::KmR成功克隆到pGEM-T载体中,进而构建得neuB1基因失活的Cj突变株。后者LPS已丧失SA基团且不能与...
【文章来源】：中华微生物学和免疫学杂志. 2005,(07)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
突变载体pGEM-neuB1::KmR的鉴定
列长度相符,表明突变载体与CjO∶19野生株染色体DNA之间发生同源重组,KmRcassette成功插入neuB1基因中(图2)。突变株PCR产物测序更进一步证实同源重组成功,且显示KmRcassette转录方向与neuB1基因相同,不会影响neuB1下游基因的活性。(2)RT-PCR鉴定:提取细菌RNA,进行neuB1基因的RT-PCR扩增,突变株RT-PCR扩增产物为阴性而野生株阳性(图2),表明野生株具有neuB1基因的转录活性,而突变株的neuB1基因由于KmRcas-sette的插入而失活。(3)突变菌株的稳定性鉴定:野生株和突变株分别连续培养25代后,其DNA的PCR和RNA的RT-PCR结果与(1)和(2)相同
*:P<0.05, compared with distilled water6·Cj菌体裂解物及LPS与CTB结合反应:结果(图4)显示,Cj野生株菌体裂解物和LPS均能与CTB发生显著结合反应,表明Cj野生株中存在与GM1寡糖基团模拟的结构。突变株菌体裂解物和LPS却皆不能与CTB结合,证实突变株中已不存在GM1样模拟结构。图4 Cj菌体裂解物和LPS与CTB的结合反应Fig 4. Assay of CTB binding toCjlysates and LPSWildCjLPS/lysate(1) could bind to CTB butthemutantLPS/lysate(2)could not, indicating that there was no GM1-like epitope in the mutant strain7·CjLPS免疫全身后豚鼠坐骨神经原纤维分离:见图5。各组分别检测1000根神经原纤维(10只豚鼠),野生株LPS免疫组原纤维异常率达17.3%(173/1000),其中65.0%为轴索变性。其异常原纤维发生率明显高于PBS对照组(1.6%, 16/1000
【参考文献】：
期刊论文
[1]neuB1失活空肠弯曲菌突变株灭活全菌苗经鼻免疫小鼠的实验研究[J]. 向淑利,蔡方成,邓兵,张晓萍. 现代预防医学. 2010(16)
[2]neuB1失活空肠弯曲菌O∶19突变株感染致病力的初步研究[J]. 向淑利,蔡方成,张晓萍. 第三军医大学学报. 2007(23)
[3]灭活全菌neuB1失活空肠弯曲菌突变株口服免疫BALB/c小鼠的实验研究[J]. 向淑利,蔡方成,张晓萍,邓兵. 中国人兽共患病学报. 2007(01)
[4]吉兰-巴雷综合征的研究进展[J]. 蔡方成,钟敏. 实用儿科临床杂志. 2006(12)
硕士论文
[1]青岛地区鸡源空肠弯曲菌流行病学、ERIC-PCR分型及毒力基因研究[D]. 翟海华.山东农业大学 2014
[2]吉兰—巴雷综合征相关空肠弯曲菌cstⅡ基因序列对比研究[D]. 孙世超.河北医科大学 2011
[3]空肠弯曲菌galE及Cj1136、Cj1138、Cj1139基因序列对比研究[D]. 李鑫.河北医科大学 2010
[4]电针五脏俞对EAN家兔协同刺激分子CD80、CD86mRNA蛋白反应水平影响的研究[D]. 贺兰兰.长春中医药大学 2009
[5]格林—巴利综合征的流行性及其危险因素[D]. 邱仁娜.吉林大学 2008
本文编号：3399547
【文章来源】：中华微生物学和免疫学杂志. 2005,(07)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
突变载体pGEM-neuB1::KmR的鉴定
列长度相符,表明突变载体与CjO∶19野生株染色体DNA之间发生同源重组,KmRcassette成功插入neuB1基因中(图2)。突变株PCR产物测序更进一步证实同源重组成功,且显示KmRcassette转录方向与neuB1基因相同,不会影响neuB1下游基因的活性。(2)RT-PCR鉴定:提取细菌RNA,进行neuB1基因的RT-PCR扩增,突变株RT-PCR扩增产物为阴性而野生株阳性(图2),表明野生株具有neuB1基因的转录活性,而突变株的neuB1基因由于KmRcas-sette的插入而失活。(3)突变菌株的稳定性鉴定:野生株和突变株分别连续培养25代后,其DNA的PCR和RNA的RT-PCR结果与(1)和(2)相同
*:P<0.05, compared with distilled water6·Cj菌体裂解物及LPS与CTB结合反应:结果(图4)显示,Cj野生株菌体裂解物和LPS均能与CTB发生显著结合反应,表明Cj野生株中存在与GM1寡糖基团模拟的结构。突变株菌体裂解物和LPS却皆不能与CTB结合,证实突变株中已不存在GM1样模拟结构。图4 Cj菌体裂解物和LPS与CTB的结合反应Fig 4. Assay of CTB binding toCjlysates and LPSWildCjLPS/lysate(1) could bind to CTB butthemutantLPS/lysate(2)could not, indicating that there was no GM1-like epitope in the mutant strain7·CjLPS免疫全身后豚鼠坐骨神经原纤维分离:见图5。各组分别检测1000根神经原纤维(10只豚鼠),野生株LPS免疫组原纤维异常率达17.3%(173/1000),其中65.0%为轴索变性。其异常原纤维发生率明显高于PBS对照组(1.6%, 16/1000
【参考文献】：
期刊论文
[1]neuB1失活空肠弯曲菌突变株灭活全菌苗经鼻免疫小鼠的实验研究[J]. 向淑利,蔡方成,邓兵,张晓萍. 现代预防医学. 2010(16)
[2]neuB1失活空肠弯曲菌O∶19突变株感染致病力的初步研究[J]. 向淑利,蔡方成,张晓萍. 第三军医大学学报. 2007(23)
[3]灭活全菌neuB1失活空肠弯曲菌突变株口服免疫BALB/c小鼠的实验研究[J]. 向淑利,蔡方成,张晓萍,邓兵. 中国人兽共患病学报. 2007(01)
[4]吉兰-巴雷综合征的研究进展[J]. 蔡方成,钟敏. 实用儿科临床杂志. 2006(12)
硕士论文
[1]青岛地区鸡源空肠弯曲菌流行病学、ERIC-PCR分型及毒力基因研究[D]. 翟海华.山东农业大学 2014
[2]吉兰—巴雷综合征相关空肠弯曲菌cstⅡ基因序列对比研究[D]. 孙世超.河北医科大学 2011
[3]空肠弯曲菌galE及Cj1136、Cj1138、Cj1139基因序列对比研究[D]. 李鑫.河北医科大学 2010
[4]电针五脏俞对EAN家兔协同刺激分子CD80、CD86mRNA蛋白反应水平影响的研究[D]. 贺兰兰.长春中医药大学 2009
[5]格林—巴利综合征的流行性及其危险因素[D]. 邱仁娜.吉林大学 2008
本文编号：3399547
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