HIV-1 Tat核心碱性区随机突变组合文库的构建及亲和筛选

发布时间：2021-09-30 09:52

　　人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus, HIV）归属于逆转录病毒科中慢病毒属,主要经血液、性接触及母婴垂直途径等传播,可引起获得性免疫缺陷综合症（Acquired Immune Deficiency Syndrome, AIDS）,即艾滋病。目前,艾滋病感染已经成为全球所面临的重大公共卫生问题。研制有效的HIV疫苗是艾滋病防治的重要手段之一。因此,探索HIV疫苗研究的新策略和寻找新的疫苗靶点对疫苗的成功研发显得尤为重要。HIV-1反式激活蛋白Trans-activator of transcription, Tat)是HIV感染早期产生的一种重要调控蛋白,在HIV-1的复制、扩散和致病中起重要作用。HIV-1感染靶细胞后,胞质中合成的Tat转移到核内,与多种转录调控因子结合组成转录起始复合体（transcription initiation complex, TIC）,促进病毒RNA的转录、延伸和病毒复制。此外,Tat还可被感染细胞通过多种方式分泌到胞外发挥“病毒毒素”的作用：①通过诱导CD4+T细胞、NK细胞或B细胞的凋亡,发挥其免疫抑制的作用；... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Tat蛋白结构

1.6.1HIV-lta七8_6:扩增区段确定根据Tat结构特点将其序列分为五个功能区段，Tat38_61将包含其中的38一48aa、49一6laa两个功能区段，见图1一3。司d沁C羚te叭一巧。h伪治b。舀沁Znde减On月....馨粼{攀蘸加..1嘟黝....日翻加即加....2分它 2323日邓日碑夕575母几考入夕习份萝O了38一61aa图1一 3Tat38_61功能区段 1.6.2HIV-ltat3，一6.引物设计根据 HIV-1HXBZ株Tat氨基酸序列(GenBank:AAN7382O.l)以及大肠杆菌偏好密码子，设计2条引物，委托上海生工生物技术有限公司合成。引物采用Primers.0软件分析评价，5’端引入BamHI酶切位点，3’端引入 Hind111酶切位点。构建HIV-ltat38一6:的引物序列见表1一1。

.6:的序列分析定阳性的单克隆分子进行序列测定，测序结果列与标准HIV-1HXBZ株tat38一l氨基酸序列完命名为pMD18一T-tat38一61。ACC.AAA.GCT.CTG.GGT.ATC.TCT.TAC.GGT.CGT.一R一G一Y一S一工一G一L一A一K一T.CAC.CAG.AACHQN611一6体外合成Hry-1HxBZ株tat38-6:序列及相对应二1原核表达质粒的构建与鉴定正确的pMD18一T-tatss-61PCR扩增产物经Bam表达载体pET32a连接，转化后阳性克隆抽质可见大小分别为5900bp(载体片段)和75bP

【参考文献】：
期刊论文
[1]HIV-1 Tat蛋白的生物学特性及其致病效应[J]. 滕竞飞,潘卫.  中国生物制品学杂志. 2009(04)
[2]Tat蛋白结构与功能的研究进展[J]. 艾菁,王丽梅,夏威,耿美玉.  细胞与分子免疫学杂志. 2005(S1)



本文编号：3415619