低血清及无血清培养Vero细胞和甲型流感病毒（H1N1）的研究

发布时间：2017-05-03 15:14

  本文关键词：低血清及无血清培养Vero细胞和甲型流感病毒（H1N1）的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,严重危害人类的生命健康。流感的预防尚无特别有效的方法,接种流感疫苗是目前最好的途径。鸡胚是流感病毒最为常用的一种培养基质,常用它来制备流感疫苗和分离流感病毒。然而鸡胚生产流感疫苗存在很多不足：生产过程易受微生物的污染；鸡蛋过敏者不适用；遗传稳定性差；难以在短时间内提供足够的鸡胚生产疫苗以应对流感大流行。鉴于鸡胚流感疫苗的局限性,哺乳动物细胞流感疫苗具有重要的运用前景。 Vero细胞是WHO推荐用于疫苗生产的细胞基质,可采用微载体发酵大规模培养,己广泛用于人类疫苗的生产。低血清及无血清培养Vero细胞一方面能解决正常细胞培养液中残留的牛血清对流感病毒有效感染必不可少的胰酶的中和作用,从而提高流感病毒在Vero细胞上的繁殖能力,获得高病毒滴度的流感病毒Vero细胞适应株；另一方面,减少甚至消除了牛血清中不明确的成分及未知的病原体,提高了流感疫苗的生物安全性。 一、Vero细胞和H1N1流感病毒的低血清培养 本研究通过对不同基础培养基的配比,添加不同浓度小牛血清进行Vero细胞的连续传代培养,观察细胞的生长状况,确定最低血清添加量为2%；以MTT法确定DMEM/F12:MEM (1:1)混合物为最适合用来培养Vero细胞的基础培养基。同时对低血清培养H1N1流感病毒的较适条件进行摸索。 二、Vero细胞和H1N1流感病毒的无血清培养 选择DMEM/F12为基础培养基,添加一定比例的蛋白质、生长因子、促贴壁因子等促进细胞生长和贴壁的物质,初步优化出适合Vero细胞生长的无血清培养基。采用不同的胞龄、pH、TPCK-胰酶浓度等培养条件进行探索,对H1N1流感病毒在无血清培养的Vero细胞上的培养条件进行优化,筛选出H1N1流感病毒的较适培养条件为：胞龄为36h、pH值在7.2-7.4之间、TPCK-胰酶含量为0.8μg/ml、基础培养基为DMEM/F12与MEM的混合物、病毒增殖时间为48h。
【关键词】：Vero细胞 低血清 无血清 H1N1流感病毒
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R373
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 第一部分 Vero细胞和H1N1流感病毒的低血清培养7-22
• 前言7
• 一、实验材料与方法7-12
• 二、结果和分析12-18
• 三、讨论18-19
• 四、小结19-20
• 参考文献20-22
• 第二部分 Vero细胞和H1N1流感病毒的无血清培养22-49
• 前言22-24
• 一、实验材料与方法24-30
• 二、结果和分析30-45
• 三、讨论45-46
• 四、小结46-47
• 参考文献47-49
• 展望49-50
• 附录Ⅰ 缩略词50-51
• 附录Ⅱ 基本实验操作51-57
• 附录Ⅲ 主要溶液的配制57-61
• 致谢61-62
• 个人简历62-63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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  本文关键词：低血清及无血清培养Vero细胞和甲型流感病毒（H1N1）的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：343258