新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞纯化及培养方法的改进

发布时间：2021-10-15 21:46

　　目的快速纯化大鼠大脑皮质原代星形胶质细胞并进行传代培养。方法取新生2日龄SD大鼠大脑皮层,每2只为一组,将剥除软脑膜的大脑皮层剪碎,添加0. 25%胰蛋白酶-EDTA溶液500μL,37℃消化15 min,将细胞悬液接种于未用多聚赖氨酸处理过的培养瓶中,37℃、5%CO₂细胞培养箱中孵育15 min后,将细胞以5×10⁶个/m L接种于L-多聚赖氨酸包被的T75培养瓶中。待细胞长满瓶底,200 r/min 37℃恒温摇18 h,加入1 m L 0. 25%胰蛋白酶,待大部分细胞悬浮后收集细胞。在倒置相差显微镜下对细胞进行形态学观察,胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色法进行星形胶质细胞纯度鉴定,并以MTS法测定传代后细胞增殖活力。结果星形胶质细胞纯度达到（97. 86±0. 91）%,细胞传代后生长情况及增殖活力良好。结论该方法可以高效获取原代及传代的大鼠大脑皮质星形胶质细胞。 

【文章来源】：卫生研究. 2019,48(05)北大核心CSCD

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试剂和仪器
    1.2 细胞培养介质处理
    1.3 星形胶质细胞的纯化及培养
        1.3.1 取出大脑皮质，剥除软脑膜
        1.3.2 胰蛋白酶消化
        1.3.3 差速贴壁法去除成纤维细胞
        1.3.4 恒温振摇纯化星形胶质细胞
        1.3.5 传代培养
    1.4 免疫荧光法鉴定星形胶质细胞
    1.5 细胞增殖活力测定
    1.6 统计学分析
2 结果
    2.1 原代星形胶质细胞形态
    2.2 星形胶质细胞纯度鉴定结果
    2.3 星形胶质细胞传代培养结果
    2.4 星形胶质细胞传代后细胞增殖活力
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]一种改进的大鼠大脑皮质星形胶质细胞的培养方法[J]. 丁娟,丁敬宾,马小虎,关立锋,杨慧莹,王志军,刘娟.  神经解剖学杂志. 2017(03)
[2]恒河猴大脑皮质星形胶质细胞的原代培养及鉴定[J]. 王建斌,冯敏,廖芸,王丽春,张莹,范胜涛,李琦涵.  中国细胞生物学学报. 2017(01)



本文编号：3438672