miR-124靶向镁转运蛋白1调控活化后人T细胞功能耗竭

发布时间：2021-10-20 11:52

　　目的研究miR-124靶向镁转运蛋白1（MagT1）可否调控活化后T细胞功能耗竭。方法 1)分离外周血单个核细胞,用IFN-γ、IL-2、抗-CD3抗体、抗-CD28抗体和IL-1α活化T细胞;流式细胞仪检测T细胞活化标记分子CD25和CD69所占的比例。2)构建miR-124/miR-124 sponge慢病毒载体;包装慢病毒后感染活化T细胞,用RT-qPCR检测感染后T细胞内miR-124和MagT1基因表达。3)生物信息学分析miR-124与MagT1的靶向位点,并用双荧光素酶报告基因系统鉴定。4)Western blot法检测慢病毒感染前后T细胞MagT1和PD-1蛋白水平。5)CCK8法检测慢病毒感染前后T细胞增殖能力;ELISA法检测细胞T分泌细胞因子TNF-α和TGF-β的能力。结果流式细胞仪检测表明T细胞活化成功。RT-qPCR检测表明慢病毒构建成功,miR-124/miR-124 sponge载体分别显著上调或下调miR-124的表达（P<0.01）。双荧光素酶报告基因系统证实miR-124靶向MagT1 3′UTR并抑制其表达。Western blot表明mi... 

【文章来源】：基础医学与临床. 2019,39(10)CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 外周血单核细胞分离与T细胞的活化:
        1.2.2 流式细胞仪检测T细胞的活化:
        1.2.3 慢病毒构建和感染:
        1.2.4 RT-qPCR检测感染后T细胞内miR-124表达水平:
        1.2.5 双荧光素酶报告基因检测系统:
        1.2.6 Western blot检测PD-1和MAGT1蛋白表达水平:
        1.2.7 CCK8法检测各组T细胞增殖能力:
        1.2.8 ELISA法检测各组T细胞分泌细胞因子TNF-α和TGF-β的能力:
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 T细胞活化
    2.2 miR-124过表达和miR-124 sponge慢病毒感染后miR-124和MagT1 mRNA表达
    2.3 miR-124过表达和miR-124 sponge慢病毒感染后检测活化后T细胞增殖能力
    2.4 检测各组T细胞分泌细胞因子TNF-α和TGF-β的能力
    2.5 miR-124靶向MagT1 3′UTR调控MagT1基因
    2.6 miR-124调控MagT1蛋白表达及对耗竭性T细胞生物标志蛋白PD-1的影响
3 讨论



本文编号：3446861