LIM矿化蛋白1/低氧诱导因子1α慢病毒载体转染脂肪源性干细胞的成骨分化

发布时间：2021-10-22 23:00

　　背景:LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α作为胞内蛋白,可分别从诱导成骨分化及促进血管再生两个方面促进成骨,联合二者高效诱导脂肪源性干细胞成骨分化具有重要的意义。目的:探讨慢病毒载体介导的LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因转染的脂肪源性干细胞成骨分化的情况。方法:应用反转录PCR技术克隆目的基因LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α片段,并分别克隆于慢病毒骨架质粒p LVX-EF1α-DsR ed-Hyg和p LVX-EF1α-IRES2-AcG FP1中,构建慢病毒载体主体质粒p LVX-EF1α-DsR ed-Hyg-RLMP-1和p LVX-EF1α-AcG FP-RHIF-1α,随即与辅助质粒和包装质粒共转染Lenti-X 293T细胞,包装慢病毒载体;采用组织块加酶消化法分离培养大鼠脂肪源性干细胞,使用流式细胞仪对其进行鉴定。分别在慢病毒转染脂肪源性干细胞3,7,14 d后,应用反转录PCR方法检测脂肪源性干细胞中成骨基因骨形态发生蛋白2、Runx-2、碱性磷酸酶、骨钙蛋白表达水平的同时检测血管内皮生长因子的表达水平。结果与结论:pL VX-EF1α-DsR ed-Hyg-R... 

【文章来源】：中国组织工程研究. 2015,19(32)北大核心

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
2 结果Results
    2.1 脂肪源性干细胞的鉴定
        2.1.1 脂肪源性干细胞的形态
        2.1.2 脂肪源性干细胞的表面标记物
    2.2 慢病毒表达载体的构建
    2.3 慢病毒对大鼠脂肪源性干细胞的最佳转染效率
    2.4转染后细胞的生长曲线
    2.5目的基因检测
    2.6 脂肪源性干细胞中成骨基因的表达
3 讨论Discussion


【参考文献】：
期刊论文
[1]突变型低氧诱导因子1α加速骨缺损部位新血管生成的实验观察[J]. 王皓,李谌,郜玉忠.  西安交通大学学报(医学版). 2015(04)
[2]Recent advances in bone regeneration using adult stem cells[J]. Hadar Zigdon-Giladi,Utai Rudich,Gal Michaeli Geller,Ayelet Evron.  World Journal of Stem Cells. 2015(03)
[3]低氧诱导因子-1α参与骨发育及骨代谢调控的研究进展[J]. 邵进,张岩,王治,杨铁毅.  中国骨质疏松杂志. 2015(03)
[4]携带低氧诱导因子1α慢病毒感染大鼠骨髓间充质干细胞后成骨基因的表达[J]. 付志杰,张巨峰,王大平,陈洁琳,段莉,何美建,李庆庆,李文翠,熊建义.  中国组织工程研究. 2014(28)
[5]LMP-1基因转染骨髓间充质干细胞的LIM矿化蛋白表达[J]. 金夏生,王子江,向川.  中国组织工程研究. 2014(23)
[6]LMP-1基因慢病毒重组体对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖影响及其表达[J]. 梁长生,向川,魏增永,侯慧铭,秦迎泽,卫小春.  中国骨伤. 2013(12)
[7]不同部位脂肪源性干细胞的生物学特性比较[J]. 林立新,黄勇,王玉婷,王鹏,王学明,姜蕾,林冠妤.  中国组织工程研究. 2013(27)
[8]LIM矿化蛋白1促进成骨的研究现状[J]. 刘会文,罗嘉全,韩智敏,曹凯.  中国骨与关节外科. 2011(04)

博士论文
[1]转染LMP-1基因人脂肪间充质干细胞与退变髓核细胞体外双层细胞微球三维条件下共培养的实验研究[D]. 李雪峰.苏州大学 2012
[2]具有成骨诱导活性的新型融合蛋白的实验研究[D]. 张大伟.第四军医大学 2007



本文编号：3451990