水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E在昆虫细胞中的表达、鉴定及免疫原性分析

发布时间：2021-10-24 04:06

　　目的:利用昆虫-杆状表达系统建立表达和纯化分泌形式的水痘-带状疱疹病毒（varicellazoster virus,VZV）糖蛋白gE的方法,并鉴定其理化性质及免疫原性。方法:利用Gibson assembly同源重组试剂盒快速构建重组质粒pFastbac-VZV gE。在sf9昆虫细胞中鉴定序列优化前后表达量的差异,并在High FiveTM细胞中大量表达。通过Ni-NTA亲和层析方法得到高纯度gE蛋白,之后通过酶联免疫吸附试验等验证了其理化性质,并进行小鼠免疫分析其免疫原性。结果:构建了pFastbac-VZV g E1/2重组质粒,经过PCR及双酶切鉴定后均为阳性克隆。使用BAC/PAC试剂盒提取Bacmid转染sf9细胞制备杆状病毒,经Western blot检测,sf9细胞开始表达gE蛋白且随着病毒代次升高g E蛋白表达量增加。序列优化后表达量明显增加,但是大部分以胞内形式存在。通过Ni-NTA一步亲和层析获得纯度较高的gE蛋白,并与VZV单抗9C8具有较好的反应性。通过免疫小鼠产生高滴度抗体,且免疫荧光结果显示其血清可以与天然病毒上的gE抗原结合。结论:成功获得了杆状表达系... 

【文章来源】：中国生物工程杂志. 2019,39(08)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 质粒、细胞和实验动物
        1.1.2 试剂
    1.2 方法
        1.2.1 Gibson同源重组
        1.2.2 细胞转染
        1.2.3 蛋白质表达纯化
        1.2.4 免疫印迹实验 (Western blot)
        1.2.5 酶联免疫吸附试验
        1.2.6 小鼠免疫
        1.2.7 免疫荧光实验
2 结果
    2.1 重组质粒p Fastbac-VZV gE1/2构建及鉴定
    2.2 杆状表达VZV gE蛋白的制备
    2.3 VZV gE蛋白的性质鉴定
    2.4 VZV gE蛋白的免疫原性分析
3 讨论



本文编号：3454541