SV40载体/COS7细胞稳定表达系统的建立与改进

发布时间：2021-10-27 09:03

　　基于猴病毒40（SV40）载体在COS7细胞内的复制没有节制并对细胞具有致死性,长期以来SV40载体-COS7系统只被用作瞬时表达。本研究的最初设想是通过在SV40载体的复制中引入负反馈机制,而使载体能在COS7细胞进行稳定表达。pctPA是实验中作为对照的重组质粒,该质粒是含SV40复制起始点（ori）_、t-PA（人组织型纤溶酶原激活剂）基因和新霉素筛选基因的SV40载体。鉴于pctPA的复制失控潜能,我们推测其难以在COS7细胞内建立稳定的转染。但结果与预期的相反,COS7细胞转染pctPA并以G418筛选4周后,长出多个形态与正常COS7细胞相似的抗性克隆。Southern Blot分析显示,在稳定的COS7抗性细胞中,质粒pctPA以染色体外附加体的形式存在,平均每细胞约含300个拷贝。提示载体在COS7细胞中的复制受到反式抑制。在COS7抗性细胞的培养液上清中,溶圈实验检测到t-PA的表达,其表达量约为1.1μg/10⁶细胞/天,与质粒pctPA在COS7作瞬时表达时（转染后48h）的水平相近。但在细胞传代中无G418压力时,t-P... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
英文缩略词表
重组质粒索引
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分
    材料和方法
    结果
    讨论
第二部分
    材料和方法
    结果
    讨论
第三部分
    材料和方法
    结果
    讨论
小结
参考文献
文献综述
致谢



本文编号：3461286