HBV感染者中抗原特异性CTL免疫应答状况的研究

发布时间：2021-10-30 10:16

　　目的1．建立体外分析抗原特异性T细胞的检测方法--四聚体染色技术，为深入探讨表位特异性CTL的生物学功能以及更全面理解HBV特异CTL在HBV感染中的致病机理奠定实验基础；2．应用四聚体染色技术和流式染色分析抗原特异性CTL在自限性和慢性HBV感染中频率和生物学功能；3．分析HBV慢性感染者抗原特异性CTL细胞功能耗竭可能机制，为慢性感染免疫调节治疗提供可能途径和新的治疗靶点。方法1．应用基因工程技术原核高效表达HLA-A^*0201-BSP、HLA-A^*2402-BSP、HLA-A^*1101-BSP和β2m蛋白后，分别与常见的HBV抗原肽在体外复性折叠成可溶性的抗原肽复合物单体；经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体；分别将复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例（5：1）耦合构建成四聚体。2．Dot blotting方法检测HLA-A^*0201-β2m-抗原肽、HLA-A^*2402-p2m-抗原肽、HLA-A^*1101-β2m-抗原肽复... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：101 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

HLA一A*0201、HLA一A*2402、HLA一A*1101复合物生物素化

华中科技大学博士学位论文在层析过程中出现3个洗脱峰，如图1一3所示，第I峰为重链多聚体，第H峰为可溶性的复合物单体，第111峰为叩m及一些小分子物质[36]。将第11峰的样本收集超滤浓缩，并与层析前的样本进行非变性队GE分析，结果显示7种生物素化后的样品经层析后均得到较纯的复合物单体(见图1一4)。HLA‘A’0201·HBV一Pol575书 63HLA·A，0201一BV一eore，8一70.8

W6/32是抗人HLAI类分子的单克隆抗体(mAb)，只能识别轻链和重链结合形成的复合物，不与单独的轻链结合，和重链仅有极微弱的结合。Dot一Blotting的结果表明(图1一5):只有7种生物素化的复合物单体能够和该构象抗体特异性结合，轻链和重链都没有结合。用w6/32和兔抗人叩m抗体进行的双抗夹心ELISA结果(图1一6)显示7种复合物单体在 A450/A630nm和空白对照相比有统计学意义(p<0.01)，这些都表明这7种复合物单体具有正确的空间构象。图1一5复合物单体构象Dot一Blotting检测l生物素化HLA一A*0201一HBV-pol575一583复合物;2生物素化HLA一 A*0201一HBV-corels一27复合物;3生物素化HLA一A*0201一HBV-env335一343复合物;4生物素化HLA一A*2402一HBV-pol756一764复合物:5生物素化HLA一A*2402一HBV-eorell7一125复合物;6生物素化HLA一 A*1101一HBV-presllo一17复合物:7生物素化HLA一 A*1101一HBV-eore88一96复合物;8重链;9轻链:0价9哎︸O蔑的图1一6生物素化复合物单

【参考文献】：
期刊论文
[1]A comparative review of HLA associations with hepatitis Band C viral infections across global populations[J]. Rashmi Singh,Rashmi Kaul,Anil Kaul,Khalid Khan.  World Journal of Gastroenterology. 2007(12)
[2]HLA多态性在广东汉族人群分布的特殊性[J]. 肖露露,陈洪涛,叶欣,马琳雅,谭茵,张升.  中华微生物学和免疫学杂志. 1999(04)



本文编号：3466552