PI3K/AKT-eNOS介导淫羊藿苷促进骨髓基质细胞和成骨细胞的成骨性分化研究

发布时间：2021-11-01 12:11

　　目前我国人口结构老龄化程度开始加重，骨质疏松症的发病率也随之增长，已成为严重影响中老年健康的多发和常见疾病之一。中草药淫羊藿（Epimedium grandiflorumMorr）具有补肾助阳、强筋健骨和祛风除湿的功能。其中，淫羊藿苷（Icariin, ICA）是淫羊藿中含量最为丰富的黄酮苷类化合物，具有显著的抗骨质疏松活性，但其作用机理尚不清楚。本实验对大鼠骨髓基质细胞（rBMSCs）和大鼠成骨细胞（OB）进行了研究，分别通过贴壁分离法和酶消化法分离获得细胞并加以鉴定，待细胞铺满皿底后分为ICA组（1×10-5mol·L-1）、LY294002组（5×10-5mol·L-1）、ICA+LY294002组和空白对照组。不同药物处理24h后分别利用Real-time PCR法检测ALP、eNOS和iNOS的基因表达水平，用Western blot法检测p-AKT、eNOS和iNOS蛋白表达量，同时测定总一氧化氮合酶（TNOS）活性、iNOS活性和NO生成量，对淫羊藿苷促进rBMSCs、OB成骨性分化的信号机理进行研究，以阐明淫羊藿苷的抗骨质疏松机制，以及为开发和应用新型抗骨质疏松药物提供... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Summary
英文缩略词
第一章 文献综述
    1 骨质疏松症及其危害性
        1.1 骨质疏松症的分类
        1.2 骨质疏松症的危害性
        1.3 骨质疏松症的发病机理
            1.3.1 性激素
            1.3.2 钙调节激素
            1.3.3 皮质类固醇激素
            1.3.4 生长激素
        1.4 国内外骨质疏松治疗现状
            1.4.1 雌激素
            1.4.2 降钙素
            1.4.3 双磷酸盐
            1.4.4 氟化物
            1.4.5 植物雌激素
    2 淫羊藿研究进展
        2.1 淫羊藿的功能和主治
        2.2 淫羊藿苷的抗骨质疏松作用
    3 成骨性分化的信号通路
        3.1 NO 与骨代谢
        3.2 PI3K/AKT 信号途径与骨代谢
    5 本研究构想
第二章 大鼠骨髓基质细胞的体外培养与鉴定
    1 实验材料
    2 实验方法
        2.1 大鼠骨髓基质细胞的分离及培养
        2.2 大鼠骨髓基质细胞的传代培养
        2.3 大鼠大鼠髓基质细胞的鉴定
            2.3.1 形态学观察
            2.3.2 细胞表面抗原鉴定
            2.3.3 矿化结节染色法鉴定 BMSCs 的成骨性分化
                2.3.3.1 茜素红染色
                2.3.3.2 Von kossa 改良法染色
    3 结果
        3.1 大鼠骨髓基质细胞的形态
        3.2 大鼠骨髓基质细胞表面抗原鉴定结果
        3.3 钙化结节染色结果
    4 讨论
第三章 大鼠成骨细胞的体外培养与鉴定
    1 材料
    2 方法
        2.1 大鼠成骨细胞的分离及原代培养
        2.2 大鼠成骨细胞的传代培养
        2.3 大鼠成骨细胞的鉴定
            2.3.1 形态学观察
            2.3.2 成骨细胞的成熟矿化检测
    3 结果
        3.1 大鼠成骨细胞的形态
        3.2 钙化结节染色结果
    4 讨论
第四章 ICA 通过 PI3K/AKT-eNOS 通路促进 BMSCs 成骨性分化
    1 材料
    2 方法
        2.1 大鼠骨髓基质细胞的分离培养及传代
        2.2 成骨性诱导培养与药物干预
        2.3 Real time PCR 法分析相关基因表达情况
        2.4 Western-blot 检测蛋白表达
        2.5 总 NOS（TNOS）、iNOS 活性和 NO 生成量的测定
        2.6 统计学分析
    3 结果
        3.1 ICA 通过 PI3K/AKT 促进 rBMSCs 的成骨性分化
        3.2 PI3K/AKT 通过 eNOS 促进 rBMSCs 的成骨性分化
        3.3 ICA 通过 PI3K/AKT－eNOS 信号途径促进 rBMSCs 的成骨性分化
    4 讨论
第五章 ICA 通过 PI3K/AKT-eNOS 通路促进 OB 成骨性分化
    1 材料
    2 方法
        2.1 成骨基质细胞的分离培养及传代
        2.2 成骨性诱导培养与药物干预
        2.3 Real time PCR 法分析相关基因表达情况
        2.4 Western-blot 检测蛋白表达
        2.5 总 NOS（TNOS）、iNOS 活性和 NO 生成量的测定
        2.6 统计学分析
    3 结果
        3.1 ICA 通过 PI3K/AKT 促进 OB 的成骨性分化
        3.2 PI3K/AKT 通过 eNOS 促进 OB 的成骨性分化
        3.3 ICA 通过 PI3K/AKT－eNOS 信号途径促进 OB 的成骨性分化
    4 讨论
第六章 结论与展望
参考文献
致谢
作者简介
导师简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]淫羊藿苷通过OPG/RANKL信号途径调节骨吸收的机理研究[J]. 马小妮,葛宝丰,陈克明,周建,王嘉琪,郭晓宇,宋鹏,吕享,成魁.  中国骨质疏松杂志. 2013(01)
[2]骨代谢分子信号通路研究进展[J]. 刘中天,尚靖.  亚太传统医药. 2012(06)
[3]淫羊藿苷与染料木黄酮对体外培养成骨细胞增殖及矿化成熟影响的对比研究[J]. 明磊国,陈克明,葛宝丰,马慧萍,周建.  中国中药杂志. 2011(16)
[4]8-异戊烯基柑橘素促进体外培养成骨细胞成熟矿化的研究[J]. 明磊国,陈克明,葛宝丰,翟远坤.  生物化学与生物物理进展. 2011(05)
[5]骨形成过程中两条重要的信号传导通路[J]. 明磊国,陈克明.  中国骨质疏松杂志. 2011(03)
[6]骨质疏松症的危害及预防[J]. 隋丽杰.  中国实用医药. 2010(32)
[7]全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞及其诱导分化[J]. 蔡鹏,朱绍兴,苏一鸣,黄世勇.  中国组织工程研究与临床康复. 2009(36)
[8]骨髓间充质干细胞成骨分化信号通路的研究进展[J]. 刘思景,郭伟韬,王辉.  现代中西医结合杂志. 2009(14)
[9]淫羊藿苷对体外培养骨髓基质干细胞成骨性分化的影响[J]. 陈克明,葛宝丰,马慧萍,刘兴炎,白孟海,马丽萍,吕明波.  中国骨质疏松杂志. 2008(09)
[10]淫羊藿苷对破骨细胞活性的影响[J]. 吕明波,刘兴炎,葛宝丰,陈克明,白孟海,汪玉海,顾九君,马丽萍.  中国骨伤. 2007(08)

硕士论文
[1]淫羊藿苷抗骨质疏松分子机理研究[D]. 翟远坤.兰州理工大学 2011



本文编号：3470092