PTEN基因对早期胚胎头部神经嵴细胞迁移的作用研究

发布时间：2017-05-06 07:34

  本文关键词：PTEN基因对早期胚胎头部神经嵴细胞迁移的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 通过研究抑癌基因PTEN在早期鸡胚中对神经嵴细胞迁移、分化的影响，为进一步对与神经嵴细胞迁移相关疾病的治疗提供基础理论支持。 方法 胚胎原位杂交：利用分子生物学方法合成chick PTEN的RNA探针，检测PTEN在早期鸡胚中尤其是神经嵴细胞及神经嵴前体细胞的原位表达情况。 电穿孔：我们选择经典的电穿孔方法来过表达PTEN突变体及野生型PTEN后用特定的神经嵴细胞marker来检测神经嵴细胞迁移情况。 免疫荧光：用特异的marker，分别用HNK1和Pax7来标记神经嵴细胞，以此来展示神经嵴细胞的迁移情况。 神经嵴细胞原代培养：为了更好地研究神经嵴细胞及更容易对神经嵴细胞定量，可以对神经嵴细胞原代培养，进而对神经嵴细胞迁移的面积、细胞数等等做统计学分析，这样可以更清楚明了地显示PTEN对神经嵴细胞的影响。 结果 chick PTEN在HH4鸡胚的上胚层和中胚层已开始表达，随着胚胎发育的继续，其在暗区及胚体均有表达。在HH9鸡胚中主要表达在神经管和神经嵴细胞中。过表达PTEN C124S后用神经嵴细胞特异的marker标记神经嵴细胞后可以发现，PTENC124的过表达没有造成神经嵴细胞迁移或者神经嵴细胞数变化，而过表达PTENWT后可以观察到过表达侧神经嵴细胞迁移收到抑制，包括神经嵴细胞迁移的纵向距离和横向距离都较对照侧变小（p0.05），从背侧神经管迁出的神经嵴细胞数也较对照侧明显变小（p0.05）。相似地，过表达只有脂质磷酸酶活性的PTEN Y138L也得到了和PTEN WT相似的结果。而过表达只有蛋白磷酸酶活性的PTEN G129E后，可以观察到其对神经嵴细胞的迁移也没有产生影响，对神经嵴细胞的细胞数也没有产生影响。对神经嵴细胞原代培养的结果也说明了LY294002抑制了神经嵴细胞的迁移，这说明了PI3K信号通路调控着神经嵴细胞迁移。 结论 过表达PTEN WT和PTEN Y138L后，，神经嵴前体细胞的粘附分子E-cadherin会上调，进而抑制了神经嵴细胞的迁移。这些PTEN的功能主要是由PTEN的脂质磷酸酶活性体现的。
【关键词】：PTEN 神经嵴细胞 胚胎发育 细胞迁移 EMT PI3K
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R321
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 目录7-8
• 1 前言8-15
• 1.1 神经嵴细胞迁移9-12
• 1.2 PTEN 基因与神经嵴细胞的迁移12-14
• 1.3 研究目的与意义14-15
• 2 实验材料与方法15-28
• 2.1 实验动物15
• 2.2 试剂与仪器15-16
• 2.3 实验溶液配置16-21
• 2.4 实验方法21-27
• 2.5 研究路线27-28
• 3. 结果28-39
• 3.1 PTEN 基因在早期胚胎及神经嵴细胞中的表达28-30
• 3.2 PTEN 的脂质磷酸酶活性抑制 HNK1 标记的神经嵴细胞迁移30-33
• 3.3 PTEN 的脂质磷酸酶活性抑制 PAX7 标记的神经嵴细胞的迁移33-35
• 3.4 PTEN 脂质磷酸酶活性通过上调 E-CAD 的表达来抑制神经嵴细胞的迁移35-37
• 3.5 PI3K 信号通路调控神经嵴的迁移37-39
• 讨论39-42
• 小结42-43
• 参考文献43-46
• 英文缩略词表索引46-47
• 在学期间发表论文清单47-48
• 致谢48

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 徐敏;PTEN/MMAC_1/TEP_1抑癌基因与子宫内膜癌的相关性[J];实用肿瘤杂志;2002年06期

2 陈明,陈洪雷,陈福春,朱润庆,刘铭球;转移性肺癌中TPEN蛋白的表达及其临床意义[J];数理医药学杂志;2002年06期

3 许逸卿,王春友,陶京,俞建雄;PTEN蛋白在胰腺癌中的表达及其意义[J];中华实验外科杂志;2003年07期

4 马玉芳,刘铭球,易建华,姚俊霞,熊奎,刘涛,朱红波;肿瘤抑癌基因PTEN在宫颈鳞癌中的表达及其与分化程度的关系[J];郧阳医学院学报;2003年01期

5 黄学勤,李清泉,李儒佑;小细胞肺癌中PTEN的表达及其与凋亡的关系[J];医师进修杂志;2004年09期

6 刘志香,路涛,黄长征,李家文,涂亚庭;皮肤肿瘤中PTEN基因突变的研究[J];中华皮肤科杂志;2004年12期

7 戴淑真,徐冰,姚勤,李超;子宫内膜癌、宫颈癌组织中PTEN基因突变的检测及意义[J];山东医药;2003年24期

8 刘斌,吴军正,雷德林,刘彦普;PTEN基因对粘液表皮样癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用[J];中国口腔颌面外科杂志;2003年01期

9 周传香;抑癌基因PTEN与头颈肿瘤研究进展[J];国外医学.口腔医学分册;2003年03期

10 项友群,徐美荣,方庆安,施公胜;c-erbB-2、PTEN在乳腺癌中的表达及其意义[J];南通医学院学报;2004年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 Emily Fox;James Pao;Sheila McCormick;;Overexpression of Arabidopsis thaliana PTEN Caused Accumulation of Autophagic Bodies in Pollen Tubes by Disrupting Phosphatidylinositol 3-Phosphate Dynamics[A];2011全国植物生物学研讨会论文集[C];2011年

2 苏玉红;康林;王磊;耿丹丹;杜鹃;;Draxin参与对鸡胚脊髓神经嵴细胞迁移的调节[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年

3 武姗姗;景雅;杨艳萍;李海荣;乔从进;张涛;;神经嵴细胞和Isl-1阳性细胞与小鼠胚胎心流出道的发育[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年

4 李艳;王晓钰;王丽京;徐涛;卢晓晔;蔡冬青;耿建国;杨雪松;;PTEN抑制胚胎原肠胚形成期EMT的过程[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年

5 姚丹;何雪;江克文;赵正言;;大鼠缺氧缺血性脑损伤后海马P13K/Akt信号通路及PTEN的分布与表达[A];2011年浙江省医学会儿科学分会学术年会暨儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2011年

6 郭小芳;陈攀;周后德;张文玲;廖前进;邓敏;唐海林;曹莉;李桂源;;LMP1通过上调miR-141影响PTEN/AKT信号通路的机制研究[A];第六届全国鼻咽癌学术大会论文汇编[C];2010年

7 金军;金永德;金顺吉;;PTEN在喉癌细胞中表达及其临床意义[A];吉林省医学会第九次耳鼻咽喉—头颈外科学术会议论文汇编[C];2011年

8 李祥勇;刘美莲;曾今诚;林观平;周克元;;PTEN基因过表达对乳腺癌细胞的化疗增敏作用[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年

9 邹志建;徐卫;范磊;乔纯;方成;董华洁;朱丹霞;王银花;刘玲;王冬梅;李建勇;;实时定量PCR检测慢性淋巴细胞白血病PTEN基因的表达及其临床意义[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

10 李东蓉;杨吉成;谢宇峰;盛伟华;朱晔涵;;腺病毒介导的PTEN基因表达对肺癌抑癌和化疗增敏作用及其分子机制的研究[A];中华医学会呼吸病学年会——2011（第十二次全国呼吸病学学术会议）论文汇编[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 刘海英　王小龙;神经嵴细胞在眼睛发育中起关键作用[N];科技日报;2011年

2 本报实习记者 马佳;鲨鱼第六感觉可以感知电脉冲[N];北京科技报;2006年

3 余志平;蛋白质水平影响乳腺癌疗效[N];中国医药报;2004年

4 梓桦;前列腺癌新药将展开临床试验[N];医药经济报;2004年

5 记者 毛磊 何德功 颜亮 张锦芳;人类仍在不懈努力[N];新华每日电讯;2003年

6 张中桥;肝癌与PTEN蛋白表达缺失有关[N];中国医药报;2002年

7 本报记者 陈丹;寻找人类的疾病基因[N];科技日报;2010年

8 通讯员 衣晓峰邋记者 李丽云;我赴美学者锁定癌症治疗药物新靶点[N];科技日报;2008年

9 姜微 钱海虹;复旦大学首次发现先天性心脏病致病祸首[N];中国医药报;2000年

10 记者 衣晓峰;癌症治疗药物新靶点被发现[N];中国中医药报;2008年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 陈洲;PTEN在拟阿尔茨海默病样细胞模型发生中的变化及作用[D];福建医科大学;2010年

2 范小平;涎腺腺样囊性癌细胞中PTEN基因启动子区甲基化状态的研究[D];重庆医科大学;2010年

3 郭亮;PTEN调控增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及相关功能的机制研究[D];第三军医大学;2012年

4 王素云;PTEN基因对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和侵袭力的影响及其机制的研究[D];河北医科大学;2010年

5 郑克彬;PTEN基因重组腺病毒治疗脑胶质瘤的实验研究[D];河北医科大学;2011年

6 张勇;抑癌基因PTEN对肝癌细胞的放射增敏作用研究[D];南方医科大学;2011年

7 周乔丹;PTEN对抗氧化蛋白调控机制及效应研究[D];重庆医科大学;2010年

8 李洪凌;PTEN基因亚细胞定位提高胶质瘤放射敏感性的实验研究[D];吉林大学;2010年

9 安君艳;腺病毒介导的PTEN基因防治大鼠肝纤维化的体内外实验研究[D];河北医科大学;2011年

10 杨春华;PTEN负调控癌蛋白AIB1的机理[D];大连理工大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张兆龙;PTEN基因对早期胚胎头部神经嵴细胞迁移的作用研究[D];暨南大学;2013年

2 崔国振;人脑胶质瘤中PTEN和COX-2的表达及临床意义[D];吉林大学;2010年

3 董华承;PTEN和nm23-H1在大肠癌中的表达及其临床意义[D];大连医科大学;2010年

4 李艳;PTEN在胚胎早期血管发生中的作用研究[D];暨南大学;2011年

5 方冬冬;口腔鳞癌组织中PTEN、COX-2表达和MVD测定及意义[D];安徽医科大学;2011年

6 戚红;宫颈癌中PTEN、P16和P15蛋白的表达及临床意义[D];青岛大学;2002年

7 张娇;PTEN在兔晶状体上皮细胞增殖中的表达及意义[D];中国医科大学;2003年

8 沈慧;原发性肝癌中PTEN蛋白表达及其与HBV感染的关系[D];山西医科大学;2004年

9 杨宁;非小细胞肺癌组织中PTEN、VEGF、MVD的表达及临床意义[D];河北医科大学;2010年

10 陈伟;抑癌基因PTEN、p27在肝细胞性肝癌组织中的表达及临床相关性研究[D];安徽医科大学;2003年

  本文关键词：PTEN基因对早期胚胎头部神经嵴细胞迁移的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：347904