一、结核分枝杆菌Hsp16.3分子伴侣活性及其相关功能的研究 二、卡介苗菌MDP1基因敲除的研究

发布时间：2021-11-15 17:44

　　结核病依然对人类健康具有极大威胁的传染性疾病之一，结核分枝杆菌（以下简称结核菌）是结核病的病因，结核菌能在巨噬细胞内长期存活是其引起结核病的主要因素之一。研究证实，存活于巨噬细胞内的结核菌能大量表达一种小分子热休克蛋白Hsp16.3。Hsp16.3的大量表达引起结核菌细胞壁的明显增厚。因此，推测Hsp16.3的表达有利于结核菌在巨噬细胞内的存活。 Hsp16.3在天然状态下是由三个三聚体组成的九聚体形式，Hsp16.3在体外最主要的功能就是其具有分子伴侣活性（molecular chaperone activity）。我们通过定点诱变其α-crystallin domain中的保守区域LPGV中的甘氨酸（Glycine G）为色氨酸（Tryptophan W），并结合Chaperone活性的检测、ANS荧光探测、CD光谱技术、非变性孔径梯度凝胶、FPLC以及内源荧光检测技术提出Hsp16.3九聚体的解聚是其发挥分子伴侣活性的前提，三聚体可能是其发挥分子伴侣活性的基本单位；同时，我们还认为，Hsp16.3的LPGV区位于其三聚体与三聚体的作用面。 通过将Hsp16.3与38k... 

【文章来源】：北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市

【文章页数】：133 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

Hsp16.3多克隆抗血清，esternblotting结果

混匀，100，C走出凝胶后，停止电泳，第三节结果.3和38kDa基因融合据HsP16.3蛋白和38kD左右。从15%SDS一PAGE4kDa左右，说明融合

融合蛋白可溶性分析巧%SDS一PAGE结果蛋白质marker;B，C分别为含pETee28a--融合基因的(DE3)破碎的上清和沉淀;D，E分别为含pETse28a一38kDa的E3)破碎的上清和沉淀第四节讨论肠杆菌中高效表达的结果往往形成包涵体(inclus原因是由于异源蛋白在宿主菌中过量表达(overp内外许多学者为解决异源蛋白在大肠杆菌中的可包括低温诱导以尽量降低目的蛋白的表达速度〔4.’在内的折叠酶以及一些分子伴侣蛋白来帮助新的目的〔’8，’幻，但结果均不理想，说明包涵体的形。

【参考文献】：
期刊论文
[1]包涵体蛋白体外复性的研究进展[J]. 方敏,黄华樑.  生物工程学报. 2001(06)



本文编号：3497230