干扰素α-2b蛋白的制备与纯化

发布时间：2017-05-07 16:05

  本文关键词：干扰素α-2b蛋白的制备与纯化，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：干扰素（IFNs）是宿主细胞在受到病原体例如病毒、微生物、寄生虫、肿瘤细胞的侵染后产生并释放的。干扰素属于糖蛋白的一种，具有干扰病毒在宿主体内复制的能力，它对于提高宿主免疫系统对病毒的识别和抵抗起到十分重要的作用，现在被广泛的运用在病毒引起的疾病和肿瘤的治疗中。本实验中的研究对象是干扰素α-2b，它属于干扰素α，同样具有抗病毒、抗肿瘤等作用。现代已经广泛的应用于肿瘤和癌症的治疗中。但是天然态的干扰素α-2b产量稀少，这样就使得需要这种药物治疗的病人承受巨大的经济负担，那么提高干扰素蛋白的产量就是摆在现在科研人员面前的一道难题。 运用重组DNA技术，人们已经可以用E coli表达系统高效表达干扰素α-2b基因，干扰素α-2b蛋白以包涵体的形式存在，这样就需要将包涵体蛋白变性、复性来得到具有生物活性的干扰素α-2b，然而这一步中极易形成聚集体和错误折叠，这个问题已经是影响干扰素大量生产的瓶颈问题。 本文通过以下途径来讨论解决提高干扰素蛋白产量的问题：1.脱氧胆酸钠促进了包涵体蛋白提取，使得产量提高了近25%；2.优化变性、复性的条件以及方法使杂质蛋白和二聚体的量显著减少；3.对离子交换层析条件、方法的优化使得一步离子交换就可以分离出二聚体和单体干扰素α-2b，提高了分离的效率简化了分离步骤。通过对以上方法的综合改良使得1L的复性液可以得到145-160mg正确折叠的干扰素2b蛋白。
【关键词】：干扰素 E coli 包涵体 蛋白质复性 蛋白质柱上纯化
【学位授予单位】：天津大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3411
【目录】：

• 中文摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 第一章 文献综述7-23
• 1.1 干扰素的发现7
• 1.2 干扰素的产生及机理7-9
• 1.2.1 干扰素的产生7-8
• 1.2.2 干扰素的作用机理8-9
• 1.3 干扰素的分类9-10
• 1.4 干扰素的功能10-12
• 1.5 包涵体中提取干扰素α-2b12-21
• 1.5.1 包涵体产生及结构特点12-13
• 1.5.2 干扰素-α2b 包涵体蛋白的变性以及复性13-19
• 1.5.3 干扰素α-2b 蛋白的柱上纯化19-21
• 1.6 总结21-23
• 第二章 干扰素-α2b 蛋白的表达23-32
• 2.1 启动子和诱导调控表达系统23-25
• 2.1.1 本部分实验所用试剂24
• 2.1.2 本实验所用仪器24-25
• 2.1.3 操作步骤25
• 2.2 干扰素α-2b 包涵体的收集25-27
• 2.2.1 菌体的破碎与包涵体的洗涤25-27
• 2.3 SDS-PAGE27-32
• 2.3.1 本部分实验所需材料及试剂配制27-28
• 2.3.2 灌制分离胶和浓缩胶28-29
• 2.3.3 电泳29
• 2.3.4 染色与脱色29-30
• 2.3.5 数据分析30-32
• 第三章 包涵体蛋白变性与复性条件的改良32-44
• 3.1 干扰素α-2b 包涵体蛋白的变性条件改良32-36
• 3.1.1 本部分实验所用试剂32
• 3.1.2 实验步骤32-33
• 3.1.3 数据分析33-36
• 3.2 干扰素α-2b 包涵体蛋白的复性条件改良36-43
• 3.2.1 本部分实验所用试剂36-37
• 3.2.2 实验方法37
• 3.2.3 数据分析37
• 3.2.4 降低在复性过程中干扰素 -2b 蛋白质之间的相互作用37-39
• 3.2.5 干扰素 -2b 蛋白复性方法的改良39-43
• 3.3 蛋白浓度的测定43-44
• 3.3.1 蛋白质浓度测定操作步骤43-44
• 第四章 干扰素α-2b 蛋白的柱上纯化44-55
• 4.1 干扰素α-2b 蛋白的阳离子柱纯化44-47
• 4.1.1 本部分实验所用试剂耗材与仪器44
• 4.1.2 实验步骤44-45
• 4.1.3 数据分析45-47
• 4.2 干扰素 2b 疏水相互作用层析47-50
• 4.2.1 本部分实验所用材料试剂及主要仪器47
• 4.2.2 实验步骤47-48
• 4.2.3 数据分析48-50
• 4.3 Native 凝胶电泳50-51
• 4.3.1 本部分实验所需试剂配方50
• 4.3.2 实验步骤50-51
• 4.3.3 数据分析51
• 4.4 羟基磷灰石层析51-55
• 4.4.1 材料试剂51-52
• 4.4.2 主要仪器52
• 4.4.3 实验步骤52
• 4.4.4 实验结果52-55
• 第五章 总结55-56
• 参考文献56-60
• 发表论文和参与科研情况说明60-61
• 致谢61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 车婧,韩金祥,王世立;促进包涵体蛋白复性的几种有效添加剂[J];医学分子生物学杂志;2004年02期

  本文关键词：干扰素α-2b蛋白的制备与纯化，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：350157