刚地弓形虫TgPRF的原核表达、多克隆抗体制备与应用

发布时间：2021-11-20 11:32

　　目的原核表达弓形虫TgPRF蛋白,制备多克隆抗体并评价其作为内参抗体的可行性。方法以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgPRF编码基因,克隆至pGEX-4T-1载体,转化至大肠埃希氏菌（Escherichia coli）BL21。经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况。利用GST标签亲和层析法纯化重组蛋白。以纯化后蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗TgPRF多克隆抗体。收集弓形虫RH株速殖子,以制备的多克隆抗体为一抗,Western blotting检测抗体特异性及效价。收集ATc调控下不同时间点的弓形虫iKO-Ty-TgAPH虫株速殖子进行Western blotting,以抗Ty和抗TgPRF抗体为一抗,检测TgAPH和TgPRF表达量的变化。结果 SDS-PAGE显示:TgPRF在诱导4 h后表达量趋于饱和,相对分子量为52 ku,且呈可溶性表达。弓形虫RH株速殖子总蛋白进行的Western blotting显示:抗TgPRF多克隆抗体可识别内源性的TgPRF,且该多克隆抗体稀释至1∶10 000时仍可见明显条带;iKO-TyTgAPH虫株速殖... 

【文章来源】：中国热带医学. 2019,19(07)

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞、弓形虫株及实验动物
        1.1.2 质粒和菌株
        1.1.3 试剂
    1.2 方法
        1.2.1 弓形虫速殖子的体外培养
        1.2.2 TgPRF基因克隆和表达载体的构建
        1.2.3 GST-TgPRF重组蛋白的表达与纯化
        1.2.4 TgPRF多克隆抗体的制备
        1.2.5 多克隆抗体的特异性与效价检测
        1.2.6 TgPRF作为内参的Western blotting实验
2 结果
    2.1 GST-TgPRF重组蛋白的表达分析
    2.2 TgPRF多克隆抗体的特异性检测
    2.3 TgPRF作为内参的可行性分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]刚地弓形虫TgPH1蛋白的重组表达及其与磷脂酰肌醇结合性的鉴定[J]. 贾永根,闫爱霞,黄敏君.  中国热带医学. 2019(03)
[2]顶复门原虫运动、入侵和逸出相关分子机制研究进展[J]. 闫爱霞,邹洋,李晶晶,李缜,贾永根,谷俊朝.  中国热带医学. 2018(09)
[3]Profilin在弓形虫侵入宿主细胞及诱导免疫应答中作用的研究进展[J]. 熊乙丁,杨瑞,岳续鹏,寥业.  中国人兽共患病学报. 2017(12)



本文编号：3507236