人线粒体tRNA～（Leu（UUR））基因点突变的研究
发布时间：2021-11-22 09:45
人线粒体DNA（mtDNA）是存在于线粒体内的双链环状DNA分子，长16，569bp，基因编码产物包括2种rRNA、22种tRNA及13种多肽链。其中多肽链是氧化磷酸化酶复合体的重要组成成分，而rRNA和tRNA则参与这些多肽链的合成。因此，mtDNA上任何基因的突变，都可能影响氧化磷酸化的功能。1988年，人类首次发现mtDNA点突变与临床疾病有关，截止目前，在mtDNA上发现的病理性突变已达50种以上，其中大部分为点突变。近年来，随着遗传科学的发展，又发现mtDNA点突变与人类衰老与某些癌症的发生有关。因而，研究mtDNA突变的产生以及突变的致病机制，对维护人类健康具有重要意义。 mtDNA突变的种类很多，由此产生的疾病症状也复杂多样。这些特点在线粒体 tRNALeu（UUR）基因（MTTL1）部位表现得十分明显。目前己发现的MTTL1基因的点突变种类有21种，突变与疾病之间的对应关系复杂，既可能一种突变产生多种疾病，也有可能多种突变产生相同的疾病症状。如3243，3252，3271，和3291位点的突变均可导致线粒体脑肌病伴乳酸酸中毒及中风样发作综合症...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
MTT细胞活力实验分组用药及结果
Contro!12345678图3Southernblot检测mtDNA氧化损伤Fig3SouthernblotanalysisofmtDNAoxidativedamageControl:CellexPosedtoHBSS+l%eitratebufferforl，2:CellsexPosedtoAlloxanforlh:3，4:CellsexPosedtoAlloxanforlhthenallowedtore5，6:CellsexPosedtoAlloxanforlhthenallowedtore7，8:CellsexPosedtoAlloxanforIhthenallowedtore2.3LM一PCR‘LM一PCR扩增EndofH和FgP酶切的人刃7艺I片段，经测序胶电泳和荧光扫描，可确定受损核昔荧光扫描结果见图4，结果显示，四氧嗜咤处理lh对照组相比，材了了艺I基因区域内核昔酸受损大幅量受损频率的指标，四种核营酸受损频率占基因%，T:31%，C:21%，12%，照相区
冰浴超声后离心以粗提细胞总蛋白，粗提液与3mlNiZ气NTA琼脂糖凝胶混合用于亲和层析。从1L细菌培养物中可得到约lmg的纯化蛋白，凝胶扫描显示蛋白纯度在95%以上(图4)。234碱116.0著66·2丽扮幸癫57.5图4人mtLeLIRS纯化过程聚丙烯酞胺凝胶电泳分析Fig4SDS一PAGEofsamPlesatdifferentstePsinthePurifieationofhumanmitochondrialIeucyl一tRNAsynthetaseThesamPleswereanalyzedonans%SDS一PAGEgelandtheProteinbandswerevisualizedbystainingwithCoomassieblue.l:E.eoliB121一CodonPlus(DE3)一RIL[PET一24a(+)一mtLeuRS]Proteinswithindueedwith0.smmol/LIPTG:2:B121一CodonPlus(DE3)一RIL[PET一24a(+)一mtLeuRSIProteinswithoutinducer:3:PurifiedhumanmitochondrialLeuRS一His6fromNi一NTAagarose;4:Proteinstandardmarkers2.3人线粒体亮氨酞一tRNA(tRNALeu(UUR))的制备以化学合成的人对了TLI基因序列为模板，用设计的引物对进行PCR扩增，得到含材丁了艺I基因的losbp的DNA片段，在t胭A基因上游为启动子
【参考文献】：
期刊论文
[1]非综合征型遗传性耳聋两家系线粒体基因突变分析[J]. 李为民,韩东一,袁慧军,王幼勤,曹菊阳,杨伟炎,姜泗长. 中华医学遗传学杂志. 2002(01)
[2]肌阵挛癫痫伴破碎红纤维的分子生物学研究进展[J]. 丛琳,曹东旭,张朝东. 国外医学.神经病学神经外科学分册. 2000(05)
[3]人外周血细胞线粒体DNA中存在特大片段缺失突变[J]. 张燕,王学敏,杨雨善,蒋蕾,郑惠民,谢惠君. 第二军医大学学报. 2000(06)
[4]人线粒体tRNA基因突变与疾病[J]. 王学敏,杨雨善. 生命的化学. 1999(04)
[5]大肠杆菌tRNALeu的基因克隆、高效表达和纯化[J]. 李勇,王恩多,王应睐. 中国科学C辑:生命科学. 1998(03)
[6]线粒体tRNALeu（UUR）基因突变糖尿病的基因诊断[J]. 项坤三,陆惠娟,吴松华,郑泰山,孙多奇,王延庆,贾伟平,钱荣立,翁青,沈卫平,何进卫,严钱勤,浦鎏,何海屏. 中华医学杂志. 1995(04)
本文编号：3511437
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
MTT细胞活力实验分组用药及结果
Contro!12345678图3Southernblot检测mtDNA氧化损伤Fig3SouthernblotanalysisofmtDNAoxidativedamageControl:CellexPosedtoHBSS+l%eitratebufferforl，2:CellsexPosedtoAlloxanforlh:3，4:CellsexPosedtoAlloxanforlhthenallowedtore5，6:CellsexPosedtoAlloxanforlhthenallowedtore7，8:CellsexPosedtoAlloxanforIhthenallowedtore2.3LM一PCR‘LM一PCR扩增EndofH和FgP酶切的人刃7艺I片段，经测序胶电泳和荧光扫描，可确定受损核昔荧光扫描结果见图4，结果显示，四氧嗜咤处理lh对照组相比，材了了艺I基因区域内核昔酸受损大幅量受损频率的指标，四种核营酸受损频率占基因%，T:31%，C:21%，12%，照相区
冰浴超声后离心以粗提细胞总蛋白，粗提液与3mlNiZ气NTA琼脂糖凝胶混合用于亲和层析。从1L细菌培养物中可得到约lmg的纯化蛋白，凝胶扫描显示蛋白纯度在95%以上(图4)。234碱116.0著66·2丽扮幸癫57.5图4人mtLeLIRS纯化过程聚丙烯酞胺凝胶电泳分析Fig4SDS一PAGEofsamPlesatdifferentstePsinthePurifieationofhumanmitochondrialIeucyl一tRNAsynthetaseThesamPleswereanalyzedonans%SDS一PAGEgelandtheProteinbandswerevisualizedbystainingwithCoomassieblue.l:E.eoliB121一CodonPlus(DE3)一RIL[PET一24a(+)一mtLeuRS]Proteinswithindueedwith0.smmol/LIPTG:2:B121一CodonPlus(DE3)一RIL[PET一24a(+)一mtLeuRSIProteinswithoutinducer:3:PurifiedhumanmitochondrialLeuRS一His6fromNi一NTAagarose;4:Proteinstandardmarkers2.3人线粒体亮氨酞一tRNA(tRNALeu(UUR))的制备以化学合成的人对了TLI基因序列为模板，用设计的引物对进行PCR扩增，得到含材丁了艺I基因的losbp的DNA片段，在t胭A基因上游为启动子
【参考文献】：
期刊论文
[1]非综合征型遗传性耳聋两家系线粒体基因突变分析[J]. 李为民,韩东一,袁慧军,王幼勤,曹菊阳,杨伟炎,姜泗长. 中华医学遗传学杂志. 2002(01)
[2]肌阵挛癫痫伴破碎红纤维的分子生物学研究进展[J]. 丛琳,曹东旭,张朝东. 国外医学.神经病学神经外科学分册. 2000(05)
[3]人外周血细胞线粒体DNA中存在特大片段缺失突变[J]. 张燕,王学敏,杨雨善,蒋蕾,郑惠民,谢惠君. 第二军医大学学报. 2000(06)
[4]人线粒体tRNA基因突变与疾病[J]. 王学敏,杨雨善. 生命的化学. 1999(04)
[5]大肠杆菌tRNALeu的基因克隆、高效表达和纯化[J]. 李勇,王恩多,王应睐. 中国科学C辑:生命科学. 1998(03)
[6]线粒体tRNALeu（UUR）基因突变糖尿病的基因诊断[J]. 项坤三,陆惠娟,吴松华,郑泰山,孙多奇,王延庆,贾伟平,钱荣立,翁青,沈卫平,何进卫,严钱勤,浦鎏,何海屏. 中华医学杂志. 1995(04)
本文编号：3511437
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