原钙黏蛋白7对小鼠皮层神经元细胞凋亡的影响

发布时间：2021-11-28 06:46

　　目的探讨原钙黏蛋白7（protocadherin 7, Pcdh7）基因在促进小鼠皮层神经元细胞凋亡中的作用及可能机制。方法原代培养的C57BL/6小鼠皮层神经元细胞,随机分为空载组（转染空白质粒）、Pcdh7过表达组（转染Pcdh7过表达质粒）、Ca²⁺通道阻滞组(转染Pcdh7过表达质粒及Ca²⁺通道抑制剂西尼地平)。转染48 h,采用流式细胞仪检测3组神经元细胞内Ca²⁺荧光强度,CCK-8法检测3组神经元细胞存活率,荧光探针法检测3组神经元细胞凋亡率。结果 Pcdh7过表达组神经元细胞内Ca²⁺荧光强度[（30.57±4.34）MFI]高于空载组[（18.60±0.57）MFI]和Ca²⁺通道阻滞组[（18.63±1.97）MFI]（P<0.05）,空载组与Ca²⁺通道阻滞组比较差异无统计学意义（P>0.05）;Pcdh7过表达组神经元细胞存活率吸光度值（0.64±0.04）低于空载组（1.01±0.03）和Ca²⁺

【文章来源】：中华实用诊断与治疗杂志. 2019,33(09)

【文章页数】：3 页

【部分图文】：

图２３组皮层神经元细胞凋亡的倒置荧光显微镜图（×２０）ａｂｃ注：ａ为空载组；ｂ为Ｐｃｄｈ７过表达组；ｃ为Ｃａ２＋通道阻滞组

１．２方法１．２．１试剂及仪器Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒、反转录试剂盒、ＶｉａＦｅｃｔＴＭＴａｎｓｆｅｃｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔ试剂盒（美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司）；ＳＹＢＲＧｒｅｅｎｓｕｐｅｒｍｉｘ荧光试剂盒（美国Ｒｏｃｈｅ公司）；Ｆｌｕｏ－３ＡＭＣａ２＋指示剂（美仑生物科技有限公司）；西尼地平（美国Ｓｅｌｌｅｃｔ公司）；ＣＣＫ－８检测试剂盒（德国Ｍｅｒｋ公司）；Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄｖｉａｂｉｌｉｔｙ／ＣｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙＫｉｔ试剂盒、ＤＭＥＭ培养基（美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）；Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ无血清培养基、无血清培养基添加剂Ｂ－２７－Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（５０×）（美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）；ＩＸＴＩ－１２ＦＬ／ＰＨ倒置荧光显微镜（日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司）；Ｍ２００Ｐｒｏ多功能酶标仪（瑞士Ｔｅｃａｎ公司）。１．２．２原代皮层神经元细胞培养孕１８．５ｄＣ５７ＢＬ／６小鼠腹腔注射过量戊巴比妥钠后处死，迅速取出胚胎，分离大脑皮层，剪碎、研磨后用质量分数０．２５％胰蛋白酶消化２５ｍｉｎ。取消化后的皮层组织，分别用１ｍＬ和２００μＬ枪头轻轻吹打３次；静置２ｍｉｎ后吸取上清并进行皮层神经元细胞计数。将皮层神经元细胞均匀铺在多聚赖氨酸包被的培养皿上培养２ｈ；用Ｎｅｕｒｏｂａｌ完全培养基（５０×Ｂ２７＋１００×ＧｌｕｔａＭＡＸ＋Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ）进行培养，３ｄ后换液。１．２．３原代皮层神经元细胞转染培养第１天，原代培养的小鼠皮层神经元细胞随机分为空载组

【参考文献】：
期刊论文
[1]E-钙黏蛋白与波形蛋白在胃癌中的表达及意义[J]. 董海峰,郑英斌,庞志刚,刘新江,董玉玺,罗乾坤,王世行.  中华实用诊断与治疗杂志. 2018(06)
[2]ICR小鼠脑发育过程中原钙黏蛋白7a表达及意义[J]. 肖华娟,亓月,李佳娜,熊轶.  中华实用诊断与治疗杂志. 2017(11)
[3]癌胚抗原相关细胞黏附分子1与CD105和CD34标记肿瘤微血管密度在肾细胞癌中的表达及意义[J]. 周红林,陈曦,田红伟,岳文彬.  中华实用诊断与治疗杂志. 2017(11)
[4]人参皂苷Rg2对东莨菪碱诱导阿尔茨海默病小鼠学习记忆的影响[J]. 商崇智,赵明亮.  中华实用诊断与治疗杂志. 2017(05)



本文编号：3523922