乙型肝炎病毒体外感染和复制的细胞模型
发布时间：2021-12-11 21:13
慢性乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染是严重威胁人类生命健康的世界性公共卫生问题。基于现有抗HBV药物的治疗策略,仅能在极少部分患者中实现慢性乙肝的功能性治愈。发展更为有效的抗HBV药物,需要更加透彻全面地认识各个病毒组分和关键宿主因子在HBV感染和复制生命周期中发挥的功能和机制,并在此基础上发现鉴定新的治疗靶点。支持HBV体外感染和复制的细胞模型,是研究HBV生活史的重要工具,并在治疗新靶点的发现和候选药物功效评估等研究工作中发挥关键作用。本文对支持HBV感染和复制细胞模型的新近研究进展进行梳理分析,并对这些模型的应用特点和局限性、新近研究进展和未来发展方向进行系统阐述和讨论。
【文章来源】：微生物学报. 2019,59(12)北大核心CSCD
【文章页数】：13 页
【部分图文】：
HBV体外感染细胞模型的生命周期模式图
1987年，Sells团队和Chang团队分别将二倍体的HBV基因组转入不同肝癌细胞实现了病毒的复制、病毒基因的表达以及感染性病毒颗粒的形成[57–58]，但病毒不能持续存在。HepG2.2.15细胞是在HepG2细胞中整合了双拷贝HBV基因组的稳定细胞株，能够稳定表达病毒基因相关产物并保证持续的HBV复制能力(表2)，已被广泛用于HBV基础生物学问题的研究，同时为早期抗病毒药物的发展提供了工具[59–60],Dandri等通过对HepG2.2.15细胞进行活性氧或DNA修复抑制剂处理，发现DNA损伤可以增加HBV整合的频率[61]。1997年，Lander等[62]利用四环素控制型CMV启动子构建了HBV 1.1倍基因组表达载体，转入HepG2细胞使其成为稳定整合HBV的HepAD38细胞株(表2)。在HepAD38细胞中，HBV pregenomic RNA的转录和病毒基因组复制可由四环素控制。与HepG2.2.15细胞系相比，HepAD38细胞系表达可调控，在Tet-off情况下HBV病毒的产量和胞内c c c D N A的积累显著高于HepG2.2.15[63]。利用该细胞系，Cui等发现TDP2(tyrosyl-DNA-phosphodiesterase 2)的缺失并不能阻断cccDNA的形成，该发现提示TDP2对于cccDNA的形成或许并不是必需的[64]。HepDE19细胞(表2)也是一种在Tet调控下表达HBV的稳转细胞系，该细胞系是将1.1倍体的HBV基因组转入细胞中，特殊的是整合的基因片段5′端pre-core的ATG突变成了GTG，而3′端pre-core的ATG保持完整，这种条件下HBV的E抗原(HBeAg)表达和分泌只能来源于共价闭合环状D N A(cccDNA),HBeAg的水平与胞内cccDNA水平是呈正相关的，从而为cccDNA靶向药物的高通量筛选提供了一个很好的模型[65–66]。在免疫检测中，由于HBeAg与HBcAg有154个氨基酸的同源性，多数用于HBeAg检测的抗体均与HBcAg存在一定程度的交叉反应，再加上naked HBV capsid的大量存在，使得在此种条件下采用商品化的HBeAg试剂检测到的可能不是真正意义上的HBeAg，可能无法准确反映胞内cccDNA的真实水平。为解决这一问题，Cai等[67]将HA标签(influenza hemagglutinin,HA)插入到HBeAg的precore区，在四环素调控下进行HBV的相关表达，以HA抗体为捕获抗体、HBeAb为检测抗体，获得了不影响HBV复制且无背景反应的cccDNA报告系统(HepBHAe82)(表2)。2.2 HBV基因组的传递载体系统
【参考文献】：
期刊论文
[1]Combination of small interfering RNA and lamivudine on inhibition of human B virus replication in HepG2.2.15 cells[J]. Gui-Qiu Li, Wei-Zhen Xu, Jing-Xia Wang, Wen-Wei Deng, Di Li, Hong-Xi Gu Department of Microbiology, Harbin Medical University, Harbin 150081, Heilongjiang Province, China Department of Histology and Embryology, Jiamusi Medical College, Jiamusi University, Jiamusi 154002, Heilongjiang Province, China Department of Anesthesiology, Second Affiliated Hospital, Jiamusi University, Jiamusi 154002, Heilongjiang Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2007(16)
本文编号：3535410
【文章来源】：微生物学报. 2019,59(12)北大核心CSCD
【文章页数】：13 页
【部分图文】：
HBV体外感染细胞模型的生命周期模式图
1987年，Sells团队和Chang团队分别将二倍体的HBV基因组转入不同肝癌细胞实现了病毒的复制、病毒基因的表达以及感染性病毒颗粒的形成[57–58]，但病毒不能持续存在。HepG2.2.15细胞是在HepG2细胞中整合了双拷贝HBV基因组的稳定细胞株，能够稳定表达病毒基因相关产物并保证持续的HBV复制能力(表2)，已被广泛用于HBV基础生物学问题的研究，同时为早期抗病毒药物的发展提供了工具[59–60],Dandri等通过对HepG2.2.15细胞进行活性氧或DNA修复抑制剂处理，发现DNA损伤可以增加HBV整合的频率[61]。1997年，Lander等[62]利用四环素控制型CMV启动子构建了HBV 1.1倍基因组表达载体，转入HepG2细胞使其成为稳定整合HBV的HepAD38细胞株(表2)。在HepAD38细胞中，HBV pregenomic RNA的转录和病毒基因组复制可由四环素控制。与HepG2.2.15细胞系相比，HepAD38细胞系表达可调控，在Tet-off情况下HBV病毒的产量和胞内c c c D N A的积累显著高于HepG2.2.15[63]。利用该细胞系，Cui等发现TDP2(tyrosyl-DNA-phosphodiesterase 2)的缺失并不能阻断cccDNA的形成，该发现提示TDP2对于cccDNA的形成或许并不是必需的[64]。HepDE19细胞(表2)也是一种在Tet调控下表达HBV的稳转细胞系，该细胞系是将1.1倍体的HBV基因组转入细胞中，特殊的是整合的基因片段5′端pre-core的ATG突变成了GTG，而3′端pre-core的ATG保持完整，这种条件下HBV的E抗原(HBeAg)表达和分泌只能来源于共价闭合环状D N A(cccDNA),HBeAg的水平与胞内cccDNA水平是呈正相关的，从而为cccDNA靶向药物的高通量筛选提供了一个很好的模型[65–66]。在免疫检测中，由于HBeAg与HBcAg有154个氨基酸的同源性，多数用于HBeAg检测的抗体均与HBcAg存在一定程度的交叉反应，再加上naked HBV capsid的大量存在，使得在此种条件下采用商品化的HBeAg试剂检测到的可能不是真正意义上的HBeAg，可能无法准确反映胞内cccDNA的真实水平。为解决这一问题，Cai等[67]将HA标签(influenza hemagglutinin,HA)插入到HBeAg的precore区，在四环素调控下进行HBV的相关表达，以HA抗体为捕获抗体、HBeAb为检测抗体，获得了不影响HBV复制且无背景反应的cccDNA报告系统(HepBHAe82)(表2)。2.2 HBV基因组的传递载体系统
【参考文献】：
期刊论文
[1]Combination of small interfering RNA and lamivudine on inhibition of human B virus replication in HepG2.2.15 cells[J]. Gui-Qiu Li, Wei-Zhen Xu, Jing-Xia Wang, Wen-Wei Deng, Di Li, Hong-Xi Gu Department of Microbiology, Harbin Medical University, Harbin 150081, Heilongjiang Province, China Department of Histology and Embryology, Jiamusi Medical College, Jiamusi University, Jiamusi 154002, Heilongjiang Province, China Department of Anesthesiology, Second Affiliated Hospital, Jiamusi University, Jiamusi 154002, Heilongjiang Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2007(16)
本文编号：3535410
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