不同浓度的胎牛血清对骨髓间充质干细胞纯度及周期的影响

发布时间：2017-05-10 00:11

  本文关键词：不同浓度的胎牛血清对骨髓间充质干细胞纯度及周期的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的比较含有体积分数为0.10、0.15、0.20的胎牛血清(FBS)的完全培养基对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)纯度及细胞周期的影响,寻求适宜干细胞培养的FBS浓度。方法用颈椎脱臼法处死SD大鼠,采用全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs。实验分为A、B、C 3组,分别为FBS体积分数是0.10、0.15、0.20的完全培养基培养的BMSCs,比较各组细胞在第2、3、4、5代(P2,P3,P4,P5)的CD45、CD29、CD90、CD44的表达情况;消化A组P3细胞,用3种不同浓度的完全培养基连续培养4 d,用流式细胞仪测其在培养后的24、48、72、96 h的细胞周期;收集P3 BMSCs制备细胞悬液接种到6块96孔板,每块板接种的BMSCs分别用FBS体积分数是0.10、0.15、0.20的完全培养基进行培养,每天取1块培养板用CCK-8检测其吸光度值(OD)。结果 CD45阴性表达,CD29、CD90、CD44阳性表达,3种完全培养基培养的BMSCs的表面标志物在前2代时差别较大,但在P3,P4时差别已较少,P4时均可以获得较纯的BMSCs;细胞周期结果显示,在同一时间点,G0/G1期:A、B、C 3组随着FBS浓度的增加,G0/G1期降低且差异无统计学意义;G2/M期:在培养后的24 h,A、B、C 3组差异有统计学意义(P0.05,F=12.412),但随着时间的延长,差异消失;S期,3组均无差别;S+G2/M期随FBS浓度的增加而增高。细胞活力结果显示,在24 h时A、B、C 3组的OD值依次增大,差异有统计学意义(P0.05,F=5.002),随时间的延长3组之间无明显差异。结论这3种培养基在P4能获得较纯的BMSCs;细胞周期及活力结果显示,3种完全培养基均能促进BMSCs的增长,3组之间不存在差异。体积分数为0.10的FBS已满足BMSCs的分离和扩增,要想在短期内获得较纯的BMSCs,原代培养使用体积分数为0.15,传代用0.10 FBS的完全培养基。
【作者单位】： 安徽医科大学口腔医学院 安徽医科大学附属口腔医院 安徽省口腔疾病研究中心实验室;
【关键词】： 骨髓间充质干细胞 胎牛血清 细胞周期 表面标志
【基金】：国家自然科学基金(编号:81371114) 安徽省自然科学基金(编号:11040606M173) 安徽医科大学博士科研资助基金(编号:XJ201034) 安徽高校省级自然科学研究重点项目(编号:KJ2013A154)
【分类号】：R329
【正文快照】： 骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是成熟体细胞的亚群,又称为基质干细胞,是治疗中应用间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)的基础。MSCs具有黏附能力并且能够在体外扩增;多分化潜能:在特定的生理或是实验条件下能分化为特定的功能细胞、组织、器官

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