小鼠生发泡完整卵母细胞中母源基因克

发布时间：2021-12-12 09:45

　　目的： 伴随卵母细胞生长的是核糖体和mRNAs转录活化，小鼠大约在排卵前6天，卵母细胞生长和分化结束而达到成熟，此时卵母细胞中合成和积累了多种RNA、蛋白质和细胞器，这些构成了早期胚胎发育的母源物质。胚胎发育从受精开始，新受精卵中就存储大量的母源物质，随着胚胎进一步发育，母源mRNAs逐渐消耗，必然需要合子基因组的适时表达并完全取代之，以实现由母型向合子型调控过渡，缺乏合子基因组激活的动物胚胎无法进一步发育。已有研究表明，小鼠合子基因组激活发生于1-细胞晚期，从未受精卵到单细胞胚胎是母源物质控制，由母源物质支持并指导了早期胚胎发育直到合子基因组激活。因此，母源物质对早期胚胎发育的作用日益受到重视，但对早期胚胎发育或对卵母细胞向合子过渡有影响的作用的母源基因极少被克隆或识别。所以，我们以生发泡完整卵母细胞（GV卵）为检测子，8-细胞胚胎为驱赶子，应用抑制消减杂交技术建立GV卵中母源基因的消减cDNA文库，从中获取小鼠母源基因，为进一步研究母源基因在卵母细胞的发育成熟、早期胚胎发育和合子基因组激活中的作用奠定基础。 方法：第四军医大学博士学位论文 1、应用抑制消减杂交技术... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：105 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

SSH的第2轮PCR扩增

.4RT-PCR结果:结果显示表2中3个基因在GV卵中有表达，而在8一细胞胚胎中不表达(图3)。表2所选取3个克隆的对应同源基因和引物序列序号同源基因引物序列预计扩增长度6Peroxiredoxinll巧T淋巴细胞瘤断裂点l25妊娠17天羊膜cDNA克隆F:5’一TI一l’一ICI’ACCCACTGGACTTCAC一3’617R:5’一GGTGGGI’AATGAGAAAGCI丁CA一3F:5’一CGTGAGGAAGAAGGCAAGT-3’296R:5’一TCTGrTTCGCI’AGTCATGTCCTI’-3’F:5’一AACTGCArGTGACACATTGCC一3’391R:5’一TCC‘l一l一l’GGTGAI，GAACAGCA一3’

的作用奠定基础。结果发现Clone6基因在GV卵、Mll卵、1一细胞胚胎和2一细胞胚胎有表达，而在4一细胞胚胎、8一细胞胚胎、桑堪胚胎和囊胚未见表达(图4)。Clone25基因同样在GV卵、Mll卵、1一细胞胚胎和2一细胞胚胎有表达，而在4一细胞胚胎、8一细胞胚胎、桑堪胚胎和囊胚未见表达，可是在GV卵、Mll卵、1一细胞胚胎和2一细胞胚胎中出现两条电泳带，短片段为391bp，与我们预期要扩增的片段长度一致，该片段在GV卵高表达，从Mll卵开始表达下降;长片段为62lbp，其在GV卵、Mll卵、1一细胞胚胎和2一细胞胚胎中的表达未见明显变化

【参考文献】：
期刊论文
[1]共聚焦激光扫描显微术研究天花粉蛋白对小鼠胚胎细胞的作用机制[J]. 徐慧,张春阳,马辉,陈瓞延.  分析科学学报. 2001(06)
[2]早期胚胎发育母源基因的表达调控[J]. 朱新产,葛文华,王宝维.  生命的化学. 2001(05)
[3]“生存还是毁灭”,发育还是阻滞──小鼠早胚体外发育2-细胞阻滞产生机制初析[J]. 邱佳菁,李逸平.  生命科学. 2000(05)
[4]M16添加牛磺酸和EDTA支持昆明白小鼠体外受精并发育至囊胚[J]. 王敏康,刘冀珑,李光鹏,廉莉,江一平,张田,陈大元.  遗传. 2000(05)
[5]昆明白小鼠1细胞胚胎体外培养系统的研究[J]. 张守全,孙拓.  动物学报. 1995(04)
[6]小鼠生后卵巢发育的形态学与组织化学研究[J]. 诸定寿,黄秀琴.  首都医学院学报. 1994(01)
[7]哺乳类早期胚胎发育阻滞的形成与突破[J]. 李逸平,左嘉客.  细胞生物学杂志. 1992(04)
[8]小鼠卵母细胞体外培养成熟及“试管小鼠”的研究[J]. 尹海林,陈秀兰.  遗传. 1989(03)



本文编号：3536448