冻融—冻干法制备流感疫苗脂质体及其细胞免疫研究

发布时间：2017-05-10 04:14

  本文关键词：冻融—冻干法制备流感疫苗脂质体及其细胞免疫研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：我们曾对薄膜分散法制备流感疫苗脂质体冻干粉作了系统的研究,并考察了其体液免疫、粘膜免疫和细胞免疫的效果,免疫原性均有明显提高。但薄膜分散法由于制备过程中有温度升高过程,不适用于活疫苗的制备。 本课题在薄膜分散-冻干法的基础上,进行了冻融-冻干法制备工艺的研究,以适应减毒活疫苗的制备要求。考察了脂质体混悬液制备过程中主要影响因素,以包封率为主要指标,以正交实验筛选出最佳处方。对脂质体混悬液和冻干粉的粒子形态,粒径分布进行了分析。以显微观察外观和包封率为指标考察了脂质体混悬液和冻干粉的稳定性,并通过肺部灌注给药方式免疫清洁级ICR小鼠,通过MTT法检测脾淋巴细胞的增殖,通过流式细胞仪检测CD4+与CD8+细胞及CD4/CD8的比值。并将冻融-冻干法与薄膜分散法制备的脂质体疫苗的细胞免疫效果进行对比。 根据最优处方制备的流感疫苗脂质体包封率为84.14%,成圆形或椭圆形,粒度分布均匀,平均粒径1.91μm。考察了在不同的温度(4℃、25±2℃、40±2℃)条件下的物理稳定性。4℃储存条件下,制备的冻干脂质体180天的包封率无显著变化,25℃制备的冻干脂质体120天的包封率无显著变化,稳定性良好。而且冻融冻干法全程制备条件温和,能适应流感裂解疫苗脂质体制备的特殊要求。细胞免疫实验表明冻融-冻干法制备的流感疫苗脂质体与薄膜分散法制备的免疫效果无显著性差异,均明显高于疫苗原液腹腔注射给药,表明冻融-冻干法是一种可行的制备流感疫苗脂质体的工艺,为未来该工艺应用于减毒活疫苗奠定了基础。
【关键词】：冻融-冻干法 包封率 稳定性 细胞免疫
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要6-7
• Abstract7-9
• 第一章 前言9-17
• 1 脂质体佐剂9-11
• 2 脂质体疫苗肺部给药11-17
• 2.1 肺部药物吸收的特点11-12
• 2.2 脂质体肺部给药方式及稳定性12-15
• 2.3 脂质体肺部给药的安全性15-17
• 第二章 冻融冻干法制备流感疫苗脂质体工艺及稳定性研究17-32
• 1 材料17-18
• 1.1 流感疫苗17
• 1.2 实验试剂17
• 1.3 实验仪器17-18
• 2 方法18-25
• 2.1 冻融-冻干法制备流感疫苗脂质体工艺影响因素实验18-20
• 2.2 冻融-冻干法正交试验处方筛选20-21
• 2.3 冻融-冻干法制备流感疫苗脂质体冻干粉21-23
• 2.4 流感疫苗脂质体形态观察和粒度分布测定23
• 2.5 流感疫苗脂质体包封率测定23-25
• 2.6 流感疫苗脂质体物理稳定性考察25
• 3 结果25-29
• 3.1 冻融-冻干法最优处方25
• 3.2 流感疫苗脂质体形态观察和粒度分布测定25-27
• 3.3 冻融-冻干法制备疫苗脂质体冻干粉包封率测定结果27-28
• 3.4 冻融-冻干法制备流感疫苗脂质体物理稳定性考察28-29
• 4 讨论和小结29-32
• 4.1 冻融-冻干法制备脂质体特点29-30
• 4.2 冻融-冻干法中包封药物步骤的选择30
• 4.3 两种方法法制备脂质体形态、粒径、稳定性比较30
• 4.4 疫苗脂质体冻干粉可减轻传统疫苗冷链运输压力30-32
• 第三章 细胞免疫-薄膜分散法和冻融冻干法制备流感疫苗脂质体干粉肺部给药的对比32-47
• 1 材料32-34
• 1.1 流感疫苗32
• 1.2 实验试剂32-33
• 1.3 实验动物33
• 1.4 实验仪器33-34
• 2 方法34-37
• 2.1 流感疫苗脂质体制备34-35
• 2.2 脾淋巴细胞增殖实验(MTT)35-37
• 2.3 T淋巴细胞表面标记检测实验37
• 3 结果37-46
• 3.1 脾淋巴细胞增殖实验结果37-38
• 3.2 T淋巴细胞表面标记检测实验结果38-46
• 4. 讨论46-47
• 参考文献47-51
• 综述 脂质体应用及研究进展51-65
• 1 脂质体制备方法51-54
• 1.1 机械分散法51-52
• 1.2 有机溶剂分散法52-53
• 1.3 逆相蒸发法53
• 1.4 钙融合法53
• 1.5 微乳冷却法53
• 1.6 冻融法53-54
• 2 脂质体给药特点54-55
• 2.1 淋巴系统定向性54
• 2.2 脂质体药物释放具有选择性54
• 2.3 使抗癌药物在靶区具有滞留性54
• 2.4 脂质体制剂在体内的生物运转54-55
• 2.5 延缓释药55
• 2.6 控制药物在组织内的分布与在血液内的清除率55
• 2.7 对瘤细胞的亲和性55
• 3 脂质体作为药物载体的应用55-57
• 3.1 在靶向药物中的应用55-56
• 3.2 在缓释药物系统中的应用56
• 3.3 口服药物中的应用56-57
• 3.4 在药物转导中的应用57
• 3.5 脂质体雾化肺部吸入剂57
• 4 作为药物佐剂57-61
• 4.1 脂质体用作疫苗佐剂的作用机理57-58
• 4.2 脂质体用作疫苗佐剂的优点58-59
• 4.3 脂质体作为疫苗佐剂的应用59-61
• 5 存在问题61-62
• 参考文献62-65
• 攻读学位期间发表文章情况65-66
• 致谢66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 周红蕾;李春玲;王贵平;侯加法;;脂质体作为疫苗免疫佐剂的应用研究进展[J];动物医学进展;2006年02期

2 陈吉祥,李广林,薛飞群,赵青云;脂质体在生物学中的应用新进展[J];甘肃畜牧兽医;2000年03期

3 鲁卫东;马波;倪俊学;李杰;;流感疫苗类脂质体制备及稳定性研究[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2010年04期

4 朱亮,俞红,冷红文,赵林,陈功星,谢泰生,邹伟民;抗乙肝免疫核糖核酸脂质体前体对小鼠生物活性的研究[J];江西医学院学报;2000年03期

5 刘洁;马波;鲁卫东;徐勇军;林华;代云波;;单价流感疫苗脂质体干粉细胞免疫研究[J];南京工业大学学报(自然科学版);2011年06期

6 陈建雯;马波;林华;乔建斌;王礼燕;鲁卫东;;流感疫苗脂质体干粉制备方法对其免疫原性影响研究[J];南京医科大学学报(自然科学版);2013年07期

7 王建英;杨桂文;田雪文;李云龙;;免疫佐剂及其作用机制[J];山东师范大学学报(自然科学版);2006年01期

8 陆伟跃,刘敏,潘俊,力弘,马俊;叶酸-脂质体制备及对HeLa细胞靶向作用[J];上海医科大学学报;2000年01期

9 谢景文,贾正平,任进余,陈义,吴斌;脂质体干扰素α对小鼠Lewis肺癌转移及脾细胞增殖的影响[J];中国生化药物杂志;1997年04期

10 罗云敬,刘海涛,李天剑,沈含熙;头孢菌素类抗生素脂质体的包封率测定与渗漏研究[J];中国生化药物杂志;1999年01期

  本文关键词：冻融—冻干法制备流感疫苗脂质体及其细胞免疫研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：354007