人TRAIL分子胞外区的克

发布时间：2021-12-18 18:35

　　TRAIL（TNF-related apoptosis-inducing ligind）又叫Apo2L，是新近发现的TNF超家族成员，与TNF-α和FasL一样能诱导肿瘤细胞发生凋亡。但TNF-α和FasL的细胞毒副反应太大，无法应用于临床。TRAIL有较广的抗癌谱，能诱导对FasL和放化疗有抗性的细胞凋亡，尤其在其抗癌作用中最独特的特征是只选择性诱导肿瘤细胞和转化细胞发生凋亡，而对正常组织和细胞没有显著毒性效应。这一特殊的选择性使TRAIL在肿瘤治疗中具有很大的应用前景，因此，有必要对其进行研究开发。 TRAIL分子的活性部分位于第114～281氨基酸，近来有研究报道，氨基酸95位前的序列具有抑制TRAIL诱导的细胞凋亡能力，较短的重组可溶性TRAIL分子具有较高的生物学活性。胞外区41～281氨基酸片断是全长的可溶性TRAIL分子，含有胞外区的所有遗传信息，目前尚未见有关这一片断的研究报道。本实验运用基因工程的原理和方法克隆编码人胞外区41～281片断的cDNA，并将其插入原核表达载体pQE-80L中诱导蛋白表达，经纯化复性后，获得有生物学活性的重组可溶性人TRAIL

【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

eRT-PCR结果

bP2000图2.3Fig2.3puezs汀以IL41一25，和pUC18的限制性内切酶谱Ideniifieationofreeombin翻bye”刃matiodigestionPUC18小TRAIL;一281/Kpnl+Hindlll:2.PUC18Plasmid:3.DL2000M田火er2.3.3重组pUC18/hTRAIL41一281质粒的cDNA序列测定对构建的重组pUC18爪TRAIL41二81质粒进行插入片断的序列测定。DNA序列图谱的结果表明，经RT-PCR扩增出的hT凡AIL4卜281基因前soQbp以内碱基序列与GenBank报道的完全一致。(图2.4、图2.5)Hindlll厂一GAAGGC以GTGCCAAGCT丁TTTT盯TACAGAAACAAAAATTGCA丁川丁AGACCAACAACAT下GGACCAT丁T盯TTGTCG丁AAAAC仁C下丁TTT仁A下GGA丁T下CCCAGGAGTTTA下TTTGC下C〔CAGTTATGTGA口CTGCTG丁AGAAATGGGTTT〔CTCAGGCANGGGGCTGG丁CATACTCAATG闪CCCCTTTT闪GGGAGTCAGCCAACTAAAAAGGCCCCGAAAAAACTGGCTTCATGGTCCATGTCTATCAAGTGCTCA80TCT盯以TTTTCCTTAAGCTCAAATATTCCCCCTT召ATAGATG以ATAGAGTCCATATTC160TATTTCTAGCACTTTT以TCAACAATATAGGGTCAGGATA人CTTGTGTATTTG下AAATATZ耳0TTCTTTGTGTTTTCTTTTATTTCCTCCTGAAATCGAAAGTATGTTTGGGAATAGATGTAG320GACCAGTTCACCAT下C〔TCAAGTGCAAG丁TGCTCAGGAATGAAT名CC以CTCCTTGATGA斗00GGCCCAGAGCCTTTTCATTCTTGGA盯TTGGAGAAGA以ATOTGTTGCT下CTTCCTCTGG鲜80ACT叮C丁GAGGACC丁CT下TCTCT以CTAGGGGAGAAATATTTTG了TGCTTTTC丁TGAACT560AGGTTCTCAAAATCATCTTTCCAACGAAGCTGACGGAAGTTTG以CTTTGACTTTGNCCA6q0CCCT丁CGTCA丁TTGGGGG丁NCCCAATAAACTGGNCATCCTTCTTT丁TNAGAAACAAAGCC720ACTTG盯C叮GGGAATCTTGGTTTCCAGCTNCGGGNAC〔CGAGCTCCNAATTC793图2.4hTRA比4，_28，的第一次测序结果F19.2.4ThefirstresultofhTRAIL;1一25一sequencing22

puc19小TRAI玩，二:1和puc19的限制性entifioatinnofrecombinantby畔川Wm2.PUC19Plasmid;3.PUC19lbLTRAIL4，凡姐L4，~2，1质粒的cDNA序列IL41一281片段的插入方向与puC18相定。DNA序列图谱的结果表明，p以内碱基序列，与报道的一致(所克隆的长723bP的hT凡似L41以81克隆编码hT凡姐L胞外区41~281氨KPnl厂一{CCGGTACCGAGC下GAAGCAGATGCAG以以AGTACTGGGACCC以ATGACGA八GAGAGTATGAACA它仁CC

【参考文献】：
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本文编号：3542964