刚地弓形虫滑行相关蛋白45的克

发布时间：2021-12-21 19:07

　　目的克隆、原核表达刚地弓形虫滑行相关蛋白45 （Tg GAP45）基因,检测重组蛋白r Tg GAP45的免疫反应性。方法提取刚地弓形虫RH株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA。根据Tg GAP45基因全长编码序列的开放阅读框设计引物,PCR扩增Tg GAP45基因。扩增产物经双酶切后连接入pET30a （+）载体,重组质粒转化至大肠埃希菌（E. coli） DH5α,阳性菌落经PCR、双酶切和测序鉴定。将重组质粒pET30a （+）Tg GAP45转化至E.coli BL21 （DE3）感受态细胞,以异丙基βD硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）结合考马斯亮蓝染色检测表达产物,分别以抗His标签抗体、人抗弓形虫血清或小鼠抗弓形虫可溶性速殖子抗原（STAg）血清为一抗,蛋白质印迹（Western blotting）鉴定重组蛋白免疫反应性。结果刚地弓形虫GAP45基因的cDNA开放式阅读框全长为738 bp, PCR扩增结果显示,在750 bp处有一条特异性扩增条带（带His标签）,与预期大小相符。菌落PCR、双酶切以及测序结果均表明重组质... 

【文章来源】：中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2019,37(05)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

TgGAP45基因的PCR扩增结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]刚地弓形虫滑行相关蛋白的研究进展[J]. 李润花,殷国荣.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2016(05)
[2]刚地弓形虫棒状体蛋白17（ROP17）真核表达载体的构建、表达及其激酶活性分析[J]. 王海龙,殷丽天,张铁娥,关丽,孟晓丽,刘红丽,殷国荣.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2014(01)
[3]刚地弓形虫肌动蛋白基因的克隆与表达[J]. 李润花,郝海霞,王海龙,孟晓丽,申金雁,殷国荣.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2013(05)
[4]弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠抵抗弓形虫感染作用的观察[J]. 殷国荣,孟晓丽,马广源,马晓明.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2007(04)

硕士论文
[1]刚地弓形虫滑行相关蛋白45基因的生物信息学分析、克隆表达及重组蛋白的免疫保护性研究[D]. 关丽.山西医科大学 2014



本文编号：3545012